Экстракт каланхоэ: Каланхоэ сок — инструкция по применению, описание, отзывы пациентов и врачей, аналоги

Содержание

Лечебные свойства каланхоэ


Каланхоэ (живородящее) – это красивое домашнее растение, купить которое можно в любом магазине цветов. Отличается оно не только прекрасным внешним видом, но и своими полезными свойствами. Многие люди используют данный цветок в лечебных целях. 



Стоит отметить тот факт, что лечебные свойства каланхоэ признают многие врачи. Его широко используют как в народной, так и в профессиональной медицине. На сегодняшний день известно множество рецептов на основе данного растения. Из него можно готовить настойки, отвары, мази и т.д. 


Каланхоэ уход в домашних условиях за которым очень простой, порадует вас не только своими лечебными свойствами, но и красотой. Данное растение не занимает много места и цветет красивыми цветочками. В народе его называют деревом жизни. Куда бы вы его не поставили, оно хорошо приживется. Главное, не забывать поливать и беречь от резких перепадов температур. 


Если вы хотите использовать растение для лечения, то стоит купить каланхоэ более старшего возраста. Тогда в его листочках, цветочках и стебельках будет содержаться гораздо больше полезных веществ. Каланхоэ в горшке хорошо разрастается, поэтому вы сможете его пересаживать и использовать так часто, как это необходимо.  


Какие разновидности каланхоэ применяются в медицине.  
Прежде, чем рассказать о целебных свойствах данного домашнего цветка и том, как правильно из него готовить различные лекарственные средства, нужно упомянуть тот факт, что для лечения подойдут не все разновидности каланхоэ. Как правило, применяют только два вида: каланхоэ перистое и каланхоэ Дегремона.  


Польза каланхоэ для человека
Польза каланхоэ для человека очень велика. Сок и листья растения помогают справиться со многими заболеваниями внутренних органов, кожи и рта. Его часто используют для ускорения заживления кожных покровов, при простуде и различных воспалениях. 


Сок каланхоэ имеет больше всего полезных веществ в своем составе. В нем можно найти различные биологически активные вещества: флавониды, ферменты, дубильные вещества, пектины, кислоты и т.д. Сок получают из листочков и побегов.


Каланхоэ противопоказания
Данное растение подходит не всем, и это нужно обязательно учитывать. У каждого из нас существуют свои особенности организма, поэтому кому-то лечение при помощи каланхоэ может подойти, а кому-то нет. Прежде, чем начать лечиться, необходимо обязательно проконсультироваться с врачом. 


Препараты на основе каланхоэ могут вызвать аллергию, пищевые расстройства, зуд, различные реакции на теле, ухудшить самочувствие и т.д. Поэтому обязательно на протяжении всего курса лечения нужно следить за общим состоянием организма и при появлении описанных проблем необходимо сразу же прекратить лечение.


Мазь из каланхоэ в домашних условиях
Мазь каланхоэ – средство, которое можно приобрести во многих аптеках. Однако также его можно приготовить дома из растения. Для этого пригодится немного: около 40 мл сока растения, 100 г безводного ланолина и по 0,25 мг новокаина и фуразолидона. Все эти компоненты смешиваются, помещаются в стеклянную тару. Храниться мазь при комнатной температуре.  


Это средство поможет справиться с любыми кожными проблемами и заболеваниями. Оно снимет боль, ускорит процесс заживления при ожоге или обморожении, экземе и даже нарыве. Косметологи его советуют тем, у кого есть проблемы с кожей лица. Домашней мазью можно мазать ноги при варикозе. 


Настойка каланхоэ. 
Настойка каланхоэ применение у которой весьма обширно, легко готовится дома. Для того, чтобы ее сделать, пригодится пол литра спирта и листочки. Это все смешивается и настаивается в течение 8 дней. Готовая смесь хранится в подвале или холодном месте. Она поможет при мастопатии, гнойничках, варикозе, заболеваниях слизистых рта, ЛОР-заболеваниях. 


Средства на основе листьев каланхоэ
Домашняя каланхоэ имеет целебные листья, из которых можно приготовить кашицу. Полученную смесь накладывают на раны или любые места, которые нужно вылечить. При правильном использовании такое средство поможет остановить кровотечение, избавиться от зуда или зубной боли, устранить инфекцию, нарыв и т.д. 


Очень полезно использовать кашицу для ускорения заживления ран (даже послеоперационных), ожогов, обморожений. Она безопасна, поэтому ее можно накладывать просто через чистый слой марли. Врачи советуют делать такие компрессы не менее получаса в день. В сложных случаях их нужно делать по несколько раз в день или оставлять на всю ночь. 


Сок каланхоэ
Сок каланхоэ лучше всего использовать сразу же, так как он быстро пропадает. Если его нужно сохранить, то предварительно листочки растения выдерживают в холодильнике, а затем выжимают сок и разбавляют спиртом (не более 20%). 


Сок поможет в профилактике простуды и гриппа. Просто капайте нос данным средством. Если есть проблемы с ротовой полостью, им можно полоскать или наносить его на слизистые. Такое средство также рекомендуется при поражениях кожи, стоматите, нагноение, артрозе и прочих недугах. 


Отвар на основе каланхоэ
Отвары из этого растения можно использовать как наружно, так и внутренне. Листочки заливаются водой и варятся около 20 минут. Очень важно, чтобы для внутреннего употребления отвар был слабым (соотношение 1:10). Полученное средство применяется для устранения кожных и воспалительных заболеваний, в том числе и ротовой полости. 


Экстракт каланхоэ 
Чтобы получить экстракт, нужно сначала сделать настой, затем прокипятить его (выпарить наполовину). Полученная жидкость пригодится для устранения заболеваний ротовой полости или ЖКТ. 


Купить каланхоэ в горшке лечебное совсем несложно. Это одно из немногих растений, которое действительно может принести много пользы. Поэтому его рекомендуется держать у себя в доме.

лечебные свойства и противопоказания, применение сока, польза и вред

Многие люди прибегают к средствам народной медицины, чтобы решить свои проблемы со здоровьем. Часто оказывается, что лекарственные растения оказываются эффективнее аптечных лекарств. Так, каланхоэ обладает лечебными свойствами, но так же и противопказаниями. Поэтому он имеет заслуженный авторитет у любителей нетрадиционной медицины.

Что такое каланхоэ

Это красивое растение встречается почти на каждом подоконнике. Оно очень красивое, с необычными перистыми листьями и разноцветными соцветиями.

С китайского языка название переводится «живородящий». Видимо из-за того, что детки по краю листа, падая, самостоятельно укореняются и вырастают. Родина каланхоэ – Южная Америка, Юго-восточная Азия, Африка. Всего насчитывается более 200 сортов.

Несмотря на обилие видов, лечебными являются лишь Дегремона и Перистый каланхоэ

Каланхоэ выполняет не только декоративные функции. Он знаменит своими целительными свойствами. Какой сорт использовать для лечения? Официальная и народная медицина используют с пользой только 2 вида: Дегремона и Перистый. Остальные не обязательно вредные, но и пользы от них не будет.

Перистое вырастает до 80 см, имеет длинный стебель, плотные перисторассечённые листья. Детки растут между зубчиков листьев. Цветки в виде метёлок превращаются в коробочки с семенами.

Дегремона родом из центральной Африки и Мадагаскара. Высота куста – 50 см. Имеет продолговатые ланцетные толстые листья, которые иногда согнуты по средней линии, как морда крокодила. Листья длиною 20 см серовато-зеленого цвета с фиолетовыми пятнами снизу. Цветёт розовыми метёлками.

В чем польза «хирурга без ножа»

Его называют «комнатным доктором», «домашним женьшенем» или «хирургом без ножа». Он полностью оправдывает все свои названия.

Обратите внимание на то, как выглядит лечебный каланхоэ – зачастую продавцы путают его с декоративным

Те, кто им пользовался или пользуется в лечебных целях, отмечают, что при его помощи раны заживают гораздо быстрее, очищаются от гноя и грязи.

Он эффективно справляется с любыми заболеваниями. Это растение признается лечебным даже официальной медициной.

 

Медицинское применение цветка

Хирургия
Стоматология
Гинекология
Оториноларингология
Офтальмология

Слава об этом растении распространилась так широко, что ученые стали изучать его целительные свойства. Это было во второй половине 20 века.

Клинические испытания подтвердили, что ожоги, язвы, плохо заживающие раны, свищи быстрее заживают, если использовать каланхоэ. С тех пор он получил признание у медицинских работников.

Состав и свойства растения

  • витамины, особенно С и Р;
  • алюминий, кальций, медь, железо, марганец;
  • биогенные стимуляторы;
  • дубильные вещества, обладающие кровоостанавливающими, противовоспалительными и вяжущими свойствами;
  • ферменты, регулируют скорость течения биохимических реакций в организме;
  • флавоноиды, имеющие антимикробные и желчегонные свойства, укрепляющие стенки сосудов, выводящие токсины и радиоактивные вещества;
  • органические кислоты: лимонная, щавелевая, уксусная, яблочная.

Есть мнение, что детки, которые растут на листьях, омолаживают тело, замедляют старение. Этот «доктор» справляется даже с язвой и туберкулёзом.

Богатое витаминами растение оказывает максимально полезное действие на человека

Каланхоэ обладает следующими свойствами:

  • ранозаживляющее;
  • кровоостанавливающее;
  • противовоспалительное;
  • очищающее кровь от токсинов;
  • бактерицидное и антибактериальное.

Дает прилив сил и бодрости владельцу, а в доме накапливается положительная энергетика. Повышается иммунитет, снижается усталость.

Как использовать сок

В период с августа до конца октября следует произвести сбор листьев и приготовить настойки, мази и сок. Потому что именно в это время в листьях наибольшее количество полезных веществ. Перед этим не поливать растение 7-8 дней.

Сок готовится в несколько этапов:

  1. Активизация биогенных стимуляторов. Требуется отрезать листья, промыть их и поставить в холодильник, завернув в бумагу, на 7 дней.
  2. Изготовление – через неделю следует измельчить до однородного состава, выжать. Отстоять его в течение нескольких часов, процедить.
  3. Стерилизация. Добавить хлороформ – 1г на 200 г сока.
  4. Консервация. Залить спиртом (70 %) – 1 часть спирта на 5 частей сока. Разлить по чистым пузырькам, плотно закрыть крышкой.

В домашнем применении сок не хранят долго, а применяют сразу после получения

Полученный сок имеет жёлто-оранжевый цвет, не совсем приятный слегка ощутимый запах. Сохраняется в течение 1 года в прохладном тёмном месте. Это промышленный способ получения. В народной медицине принято применять сразу и без примесей.

Лечит: стоматологические болезни, конъюнктивит, гнойные раны, стоматит, ожоги, ирит, иридоциклит. Облегчает состояние при артрозе, полиартрите, периартрите.

При стоматите, болезнях горла и дёсен – делать аппликации 3 р в день.

Наружное применение: пролежни, нарывы, трещины сосков, гингивит, стоматит.

Сок каланхоэ ускоряет метаболизм, очищает и излечивает раны, обладает противовоспалительным эффектом. При наружном применении наносят, втирая в кожу или в виде повязок. Результат проявляется через 20 дней.

Лекарственная мазь

Мазь готовится тремя способами:

  1. 40г сока, 125 фуразолидона, 025г новокаина, 100г ланолина. Смешать ингредиенты. Получится смесь, как густые сливки. Хранится при обычной температуре.
  2. Полстакана сока каланхоэ, 1 ст. л почек тополя, 1ст. л зверобоя, 100г подсолнечного масла. Смешать, настоять несколько часов, ещё раз перемешать.
  3. 30 г сока каланхоэ, 50 г ланолина, 50 г вазелина.

Отлично справляются с разного рода нарывами, ранами, кожными болезнями, свищами. Помогают снять боли. Эффективны при обморожениях. Третья мазь незаменима при лечении чирьев, пролежней и трофических язв. Косметологи успешно применяют при лечении угрей и пятен на лице.

Лечебная настойка

Промыть и нарезать листья, наполнить ими пол-литровую баночку. Залить сверху спиртом или водкой. Поставить в тёмное место на 10 дней. Время от времени встряхивать. Процедить, перелить в плотно закрывающуюся посуду. Хранится долго.

Как и прочие средства из этого цветка, мазь хранится достаточно долго

Используется при варикозе: натирать ноги, снизу от ступней до колен. Излечивает панариций, грудницу, мастопатию. Используется при стоматите, гингивитах, гнойных воспалениях на коже.

Для получения кашицы измельчить листья в мясорубке, выжать сок. Выжимки завернуть в марлю и приложить к больному месту.

Помогает при кровотечениях, зубных и других видах боли. Излечивает гнойные инфекции, снимает кожный зуд. Уменьшает время заживления швов и ран после хирургических вмешательств.

Комплексное  домашнее лечение

Эффект каланхоэ проявляется в большей степени в сочетании с другими средствами. Обычно его используют вместе с физиотерапевтическими процедурами и антибиотиками.

Очень хорошо сочетается с мазью зверобоя, в комплексе с алтеем, ромашкой, семенем льна, донником.

Целебный настой и экстракт

Каланхоэ залить горячей водой в соотношении 1 к 5, если настой готовится для наружного применения, 1 к 10 – если для внутреннего. Держать на водяной бане 15 минут.

Используется для лечения вен, ожогов, гнойных ран. Помогает лечить болезни ЖКТ, гинекологические заболевания, туберкулёз.

Излечивает кожные проблемы, дёсны, гастрит и колит. При колите – пить 2 р в день до еды, 1 месяц.

Чтобы получить экстракт дома следует настой выпарить до половины объёма. Используется для лечения десен, тонзиллита, болезней зубов и ЖКТ.

Каланхин – лекарственное растение в медицине

Это аптечный противовоспалительный препарат для внутреннего и наружного применения. Обладает всеми свойствами сока. Заживляет раны, язвы, лечит кишечник.

Каланхин – один из немногих препаратов с Каланхоэ, официально продающийся в аптеках

При гастрите, дуодените, энтероколите пить по 1 ч. л. на полстакана воды 4 раза в день. Иногда наблюдаются побочные эффекты: изжога, понос, аллергия.

Противопоказания: кому вредно такое лекарство

Лечение каланхоэ практически безвредно, не имеет побочных эффектов. Потому что в нём нет токсичных веществ. Но в ряде случаев это растение имеет противопоказания:

  • беременность;
  • аллергия и индивидуальная непереносимость;
  • болезни печени: цирроз, гепатиты;
  • гипотония;
  • опухоли разного происхождения.

Как и с большинством прочих лекарств, беременность является строгим противопоказанием к лечению Каланхоэ

Прежде чем начать лечение каланхоэ, следует выяснить у врача, возможно ли применение этого препарата при вашей истории болезней. Нужно удостовериться, что у вас нет аллергии и непереносимости.

Народное применение от насморка и прочего

  • Варикозное расширение вен. Используется настойка. По вечерам натирать ноги движениями снизу вверх к коленям. Курс 4 месяца. Или: пропитать соком марлю, наложить на вены на 1 час. Курс – 10 дней.
  • Кашель. Внутрь принимать сок каланхоэ и мёд.
  • Геморрой. При лечении геморроя используются компресс с каланхоэ или мазь с ланолином и вазелином. Можно прикладывать свежий листик к шишкам.
  • Насморк и простуда. При простуде нужно капать сок каланхоэ в нос по 1-2 капли 3 р в день. Очищает нос, убивает микробы.

Сок следует разбавить водой, чтобы не допустить ожога.  Можно смазывать слизистую и крылья носа. То же самое делать для профилактики.

Некоторые люди советуют жевать промытый листик каланхоэ несколько раз в день после еды.

Прежде чем закапать сок от насморка ребенку уточните, нет ли у него аллергии на это растение

  • Синусит и гайморит. Появляются как осложнение гриппа и простуды. Разбавить кипячёной водой в соотношении 1:2 и капать в нос. Также втягивать сок в нос 3 раза в день. Этими способами гайморит можно вылечить за 1 неделю.

Сок желательно брать свежевыжатый. При закапывании появляется зуд и жжение в носоглотке. Человек начинает чихать. Это способствует очищению пазух носа. Уменьшается воспаление, облегчается дыхание.

  • Аденоиды у ребёнка. При лечении аденоидов используют сок каланхоэ. Его разбавляют водой и промывают горло. Снимается воспаление и очищаются от слизи миндалины.

Он вызывает раздражение, и ребенок начинает чихать. Слизь отделяется и отхаркивается.

Можно развести сок наполовину тёплой водой и закапать в носик по 2-3 капли.

Перед лечением ребёнка обязательно нужно посоветоваться с врачом.

  • Воспаление дёсен. При воспалении народные целители советуют срывать несколько раз в день листочки каланхоэ, хорошо их помыть и жевать в течение 10 минут.

Если нет времени, можно делать это один раз в день. Сочетать с втиранием в дёсны. При этом надо массировать десны. Укрепляются зубы, а проблемы с дёснами исчезают.

Помимо домашнего, можно приобрести аптечный сок каланхоэ, но он на спиртовой основе

Можно делать орошение полости рта соком каланхоэ. Развести кипяченной водой, набрать в шприц и ввести после чистки зубов, после завтрака и перед сном.

  • Кожа. Излечивает многие гнойные и воспалительные заболевания кожи. При фурункулёзе эффективен совместно с мазью зверобоя. Бородавки – кашицу каланхоэ накладывать, менять повязку 2 раза в день. Лечение длится неделю.

Условия использования цветка в косметологии

Широко применяется при уходе за лицом и телом. Маски с кашицей при условии правильного использования устраняют серьёзные косметические проблемы, например, розовые угри.

Лосьоны уменьшают жирность кожи, стягивают поры, дезинфицируют:

  1. 1 белок, по полстакана туалетной воды, камфарного спирта и 2 ложки сока каланхоэ.
  2. 50 г сока и 1 ч л спирта.
  • Для сухой кожи смешиваются мёд (1 ч л), вода (полстакана) и сок каланхоэ.

Правильно приготовленный лосьон поможет избавиться от проблем с кожей

  • Угри. Протирать настоем после чистки лица.
  • Прыщи. Протирать лицо утром и вечером
  • Тёмные круги под глазами. Снять верхний слой с листка и приложить к глазам. Или сделать примочки с соком.

Каланхоэ справляется с пигментными пятнами и делает морщины менее заметными. Просто сорванный, без кожицы, лист отлично очищает кожу лица.

Масляный компресс с кашицей излечивает выпадение волос. Курс лечения помогает восстановить блеск и структуру волос.

Не только каланхоэ обладает целебными свойствами для человека. Так, мы уже рассматривали пользу других комнатных растений. Например, как толстянка (денежное дерево) помогает от разных недугов.

Каланхоэ – это уникальное и универсальное средство лечения и ухода за собой. Не следует заниматься самолечением – это может принести вред. Прежде чем использовать любое народное средство, нужно обязательно проконсультироваться у врача.

Готовим лекарства из каланхоэ

Автор:

Елена Н.

Категория: Комнатные растения Опубликовано: Последние правки:

Каланхоэ перистое – быстрорастущее неприхотливое растение, которое давно поселилось на наших подоконниках и получило признание благодаря своим лекарственным свойствам. У каланхоэ есть и другие названия: дерево жизни, дерево Гете, комнатный женьшень, домашняя аптека.
Свойства каланхоэ используют не только в народной, но и в официальной медицине, однако каждый обладатель этого растения может приготовить из него эффективное лекарство в домашних условиях без всяких сложностей.

Характеристика каланхоэ

Целебные свойства каланхоэ

Каланхоэ содержит алкалоиды, стероиды, липиды, дубильные вещества, органические кислоты, витамины P и C, каротин, флавоноиды, антиоксиданты, медь, железо, кальций, селен, магний и другие элементы и фитохимические соединения, причем многие из них в высокой концентрации. Препараты на основе сока каланхоэ применяют как наружно для лечения повреждений и воспалительных процессов на коже и слизистых оболочках, так и внутрь при простуде, бронхите, гриппе и даже туберкулезе.

Препараты из каланхоэ

Лекарство первое: сок каланхоэ

Основой любого лекарственного препарата из каланхоэ является сок листьев и побегов растения, но чтобы лечебные свойства проявились максимально, сок нужно правильно добывать: сорванные крупные зеленые листья нужно подержать 4-5 суток при температуре 2-8 ºC, затем посечь ножом или пропустить через мясорубку, отжать через марлю из полученной массы сок, двое суток выдержать его при температуре 10 ºC, а перед применением опять процедить. Если вы хотите законсервировать сок каланхоэ, разведите его медицинским спиртом до 20 %, залейте в стерильную стеклянную посуду и закупорьте. Приобрести сок каланхоэ можно и в аптеке.

На фото: Лекарство из каланхоэ

Лекарство второе: мазь

Для того чтобы приготовить мазь из каланхоэ, вам понадобится 40 мл сока растения, 100 г ланолина и по четверти грамма фуразолидона и двухпроцентного новокаина. Все ингредиенты нужно тщательно смешать. Хранят препарат при комнатной температуре, а используют как наружное лекарственное средство для лечения ран, пролежней, свищей, нарывов, обмороженных участков, сыпи, экземы. Снимает мазь на основе сока каланхоэ и острую боль.

13 способов использовать алоэ в косметических целях

Лекарство третье: кашица из листьев

Листья растения нужно мелко нарубить ножом или пропустить через мясорубку с крупной решеткой. Из полученной массы отжимают сок, но не досуха, а влажный жмых используют в виде припарок и примочек для остановки небольших кровотечений, снятия зуда и при гнойной инфекции кожных покровов. Кашица также ускоряет процесс заживление ран и послеоперационных швов.

На фото: Мазь из каланхоэ

Лекарство четвертое: настой

Нарезанные листья каланхоэ кладут в эмалированную посуду, заливают кипятком в соотношении 1:5 для наружного применения и 1:10 для внутреннего, накрывают емкость крышкой и прогревают на водяной бане 15-20 минут, а после остывания процеживают. Применяют настой для лечения ожогов, воспаления век, слизистой рта, полоскания горла, а также внутрь при хроническом колите и гастрите с пониженной кислотностью. Желудочно-кишечные болезни лечат настоем в течение месяца, выпивая по 1 столовой ложке 2 раза в день за полчаса до приема пищи.

Если же вы выпарите настой на водяной бане до половины первоначального объема, то получите экстракт каланхоэ, который хорошо справляется не только с болезнями десен и тонзиллитом, но также помогает при лечении болезней желудочно-кишечного тракта.

Лекарство пятое: настойка

Этот препарат используют для лечения варикозного расширения вен и других подобных заболеваний. Для получения настойки 2 столовые ложки измельченных листьев каланхоэ кладут в стеклянную посуду, заливают бутылкой водки, закупоривают и настаивают 10-14 дней в темном месте, периодически взбалтывая.

Список из комнатных растений с лечебными свойствами

Для усиления противовоспалительного, бактерицидного, кровоостанавливающего и антисептического действия каланхоэ его целесообразно сочетать с другими лекарственными растениями или с мазями, содержащими антибиотики.

Противопоказания

Нельзя применять каланхоэ при индивидуальной непереносимости входящих в его состав веществ. Не рекомендуется также лечить препаратами растения детей до шести лет. Осторожность при приеме препаратов каланхоэ внутрь должны проявлять люди с пониженным артериальным давлением и страдающие болезнями почек. Перед тем, как вы начнете принимать препараты каланхоэ, проконсультируйтесь с врачом.

Информации о лечебных свойствах каланхоэ вы также можете получить из следующего видеоматериала:

Литература

  1. Читайте по теме на Википедии
  2. Особенности и другие растения семейства Толстянковые
  3. Список всех видов на The Plant List
  4. Дополнительная информация на World Flora Online

Разделы: Комнатные растения Красивоцветущие Декоративно-лиственные Толстянковые Суккуленты Лекарственные

После этой статьи обычно читают

Добавить комментарий

Press-room — IBCh RAS

Объявления →

  • science news Mechanism of coelenterazine chromophore photoinactivation from Beroe abissycola photoprotein is proposed
    August 27

    Scientists from IBCh RAS with colleagues from Photobiology Lab (IBP SB RAS) elucidated the structures of Beroe abissycola photoprotein’s chromophore photoinactivation products and proposed a mechanism of the photoinactivation process. The similarity of chemical transformations of photoprotein and GFP-like fluorescent protein chromophores was demonstrated for the first time. The results are published in Organic Letters. The project was funded by the RScF grant № 17-14-01169p.


     

  • science news Essential role of zinc ions in TLR1 receptor activation
    August 24

    Toll-like receptors are the key players of the innate immune response. Despite the numerous studies and huge amount of data regarding these proteins, the structural basis of their functioning has not yet been clearly elucidated. Scientists from IBCh RAS, together with their colleagues from Moscow Institute of Physics and Technology and Changchun Institute of Applied Chemistry (China) discovered the essential role of zinc in the functioning of Toll-like receptor 1 and proposed possible mechanisms of zinc-mediated receptor activation. The work was funded by the RFBR grant 20-34-70024 and published in Communications Biology. 

  • science news New structural data allowed to study the mechanism of thermal activation of thermosensitive ion channels of the TRP family
    August 12

    Scientists from the Laboratory of biomolecular modeling of the IBCh RAS, together with colleagues from Columbia University (New York, USA), the University of Illinois (Peoria, USA), and the Institute of Physiology of the Czech Academy of Sciences (Prague, Czech Republic), have revealed the structural mechanism of heat-induced opening of temperature-sensitive TRP channels.

  • science news Investigation of long-term fate of magnetic nanoparticles in mice
    July 15

    Scientists from Laboratory of molecular immunology of IBCh RAS performed first broad comprehensive study of factors which influence degradation rate of magnetic particles in mammals. For this aim magnetic spectral approach was developed, allowing non-invasive and quantitative measurement of magnetic particles in mice without influence of biogenic iron. Researchers studied the key factors that determine the degradation rate of nanoparticles: particle dose, size, zeta potential, type of polymer coating and internal architecture of nanoagents. The revealed deeper insights into the particle degradation in vivo may facilitate rational design of theranostic nanoparticles with predictable long-term fate in vivo. The work was published in ACS Nano.

  • conferences Conference «Pathological changes in the central nervous system. From model to the patient.»
    June 20
  • funds FEBS Excellence Awards
    June 7

    Please note that applications for the new FEBS Excellence Awards are now open (from 1st June) and will close on 1st September.  The online application system is here: https://fellowships.febs.org/ea_2021 and full details can be found on the FEBS website here: https://www.febs.org/our-activities/fellowships/febs-excellence-awards/. FEBS Excellence Awards are intended to support research projects in the molecular life sciences from early-career group leaders. They are granted over three years and amount to €100,000.

  • science news Complex-dependent histone acetyltransferase activity of KAT8 determines its role in transcription and cellular homeostasis
    May 18

    International research team together with researchers from IBCh RAS studied molecular mechanisms of histone acetyltransferase KAT8 activity. The enzyme regulates DNA compactization and gene transcription regulation by acetylation of histone h5 and is essential for cell viability. The results are published in the journal Molecular Cell.


     

  • science news 2021 research grants
    May 12

    In 2021, we are offering a series of research grants to stimulate innovative research in challenging areas of future importance. Grants of 40,000 € — 450,000 € per year for up to 3 years are available in the areas as further specified below. More info — researchgrants.merckgroup.com.

  • science news Conformational changes in the receptor tyrosine kinase IRR during activation were determined
    April 5

    Researchers of the Laboratory of Receptor Cell Biology IBCh RAS together with colleagues from the IPCE RAS and IC RAS carried out a study of the IRR structure by atomic force microscopy and small-angle X-ray scattering. The conformations of the receptor in the active and inactive states have been determined; on the basis of the obtained data, an activation mechanism has been proposed.

  • science news The role of natural mutations of the human protein SLURP-1 in the pathogenesis of Mal de Meleda skin disease has been determined
    March 29

    Mal de Meleda (MDM) is recessively inherited palmoplantar keratoderma associated with mutations in a gene encoding SLURP-1 protein. SLURP-1 is a paracrine regulator of keratinocyte homeostasis interacting with the α7 type nicotinic acetylcholine receptor (α7-nAChR). This receptor participates in control of growth, terminal differentiation, apoptosis and cornification of keratinocytes. Dysregulation of the α7-nAChR function due to SLURP-1 deficiency or point mutations of this protein may underlie MDM pathogenesis.

  • science news Lipids 2021 Conference
    October 11–13

    Lipids 2021 Conference, October 11-13, 2021, IBCH RAS, Moscow

  • ys-ad Gene therapy 2.0: AAV beyond monogenic gene correction
    June 11–23 (This event is over)

    Founding and managing partner of 4BIO Capital — Dmitry Kuzmin — will make a presentation in conference room 22 June 2022 at 15:00

  • science news «Molecular Brain» seminar dedicated to Eugene Grishin’s 75th anniversary
    April 27 (This event is over)

    The open seminar of the Department of Molecular Neurobiology will take place on April 27 at 11:00 in the Great Assembly Hall. The program includes presentations by colleagues, students, friends and associates of Eugene Grishin. We cordially invite everyone interested in modern work in the field of toxins, ion channels and neurobiology! Live broadcast in Zoom.

  • conferences International School «Molecular mechanisms of neurodegenerative diseases»
    November 26, 2020 (This event is over)

    Moscow Institute of Physics and Technology (MIPT) invites you to take part in the International school for young scientists «Molecular mechanisms of neurodegenerative diseases», which will be held on November 26, 2020 online.

  • science news Lecture by Director-General of the ICGEB Lawrence Banks «Human Papillomaviruses: From Infectious Entry to Malignancy»
    January 27, 2020 (This event is over)

    ICGEB Director-General Group Leader Lawrence Banks will deliver a lecture entitled «Human Papillomaviruses: From Infectious Entry to Malignancy». 

    Date and time: Mon 27 January 2020 14:00. Location: Small conference hall at 3rd floor BON IBCh.

  • science news LIGHTS ON: Molecular Imaging of disease dynamics in vivo
    September 27 — October 11, 2019 (This event is over)

    Abhijit De PhD

    Scientific Officer ‘F’ and Principal Investigator

    Head, Molecular Functional Imaging Lab

    Advanced Centre of Training Research and Education in Cancer, Tata Memorial Centre, Kharghar, Navi Mumbai, India.

  • science news Seminar «Molecular Brain»: Anton Maximov
    October 8, 2019 (This event is over)

    The seminar will be held on the 8th of October at 3 pm in the Small lecture hall (3rd floor, BON, IBCh). Everyone is welcome!

  • conferences II Joint Life Sciences Forum: VI Russian Congress on Biochemistry and IX Russian Symposium «Proteins and Peptides»
    October 1–6, 2019 (This event is over)

    Dear Colleagues! We are pleasure to invite you to participate the VI Russian Congress on Biochemistry, which will be held in Sochi, Russia (Dagomys Hotel) on October 1-6, 2019.

  • science news Lecture by Prof. Yibo Wang «Drug Discovery Targeting Transmembrane Protein-Protein Interactions»
    August 26, 2019 (This event is over)

    Prof. Yibo Wang from the Changchun Institute of Applied Chemistry will deliver a lecture entitled «Drug Discovery Targeting Transmembrane Protein-Protein Interactions». Date and time: Mon 26 August 2019 11:30. Location: Conference hall at 5th floor BON IBCh.

  • conferences 12th INTERNATIONAL CONFERENCE “BIOCATALYSIS.FUNDAMENTALS & APPLICATIONS” “BIOCATALYSIS-2019”
    June 24–28, 2019 (This event is over)

    Dear colleagues,
    The Lomonosov Moscow State University and RAS institutes, including IBCH RAS, is planning to convene a traditional biannual 12 th International Conference «BIOCATALYSIS-2019» in June, 24–28, 2019. Conference will be convened on board a ship cruising via the route St. Petersburg – Valaam – Kizhi – St. Petersburg.

    More info is available at http://bc2019.org/.

Масляный экстракт каланхоэ оптом.

Описание товара

Масляный экстракт каланхоэ готовят извлечением в масло активных полезных веществ, которые содержатся в листьях этого «комнатного женьшеня». Многие используют как косметическое сырье даже не специальные экстракты и масла растения, а непосредственно сок и кашицу из цветка на подоконнике, что собственно, столь же полезно. Конечно, выращенные в природных условиях растения содержат больше активов, но в целом — состав любого каланхоэ чрезвычайно ценен и полезен.

В составе сока, который получают из комнатного каланхоэ будет содержатся антиоксидант вит. С, железо, кальций, медь, марганец, дубильные вещества, полисахариды, яблочная, щавелевая и уксусная кислоты, различные ферменты.

Считается, что само присутствие этого растения в помещении создает благоприятную ауру и мягкую, успокаивающую энергетику, повышает жизненный тонус, обеспечивает спокойный сон и прогоняет тревоги.

При помощи косметики и очищающих средств с масляным экстрактом каланхоэ избавляются от гнойных болезней кожи, лечат свищи, пролежни, трофические язвы. Сок каланхоэ используют при пародонтозе и кровящих деснах. Используют и ингаляции с каланхоэ. Но необходимо помнить что сок или экстракт каланхоэ — наружное средство и не должно употребляться внутрь!

Терапевтическое действие каланхоэ:

  • заживляет раны
  • помогает против простуды;
  • снимает воспаление,
  • излечивает насморк,
  • останавливает кровотечения,
  • лечит гнойные воспаления,
  • эффективен против мастита,
  • заживляет обморожения, свищи, ожоги;
  • эффективен при кожных болезнях и т.д.

Косметические свойства масляного экстракта каланхоэ:

  • Благодаря высокому содержанию активов, которые оказывают влияние на межклеточный обмен в дерме и эпидермисе, используется в лечебных мазях и кремах для больной кожи;
  • Прекрасно подходит в косметику для восстановления уровня увлажнения кожи;
  • Высокие питательные свойства каланхоэ используются в косметике для истощенной, возрастной кожи и волос;
  • Повышает эластичность кожи;
  • В антивозрастной косметике благотворное воздействие на омоложение кожи оказывают свойства каланхоэ повышать тонус, активизировать местное кровообращение и улучшать лимфоток;
  • Следует отметить и особые разглаживающие свойства каланхоэ в кремах для шеи и декольте;
  • Используется как компонент, которых проявляет активность против фурункулов, прыщей, угревой сыпи и т.д;
  • Компонент в питательные и антивозрастные маски, очищающие скрабы против угревой сыпи, тоники для ежедневного профилактического ухода за проблемной кожей;
  • Наличие щавелевой, уксусной и яблочной кислот в комплексе с другими активами, обеспечивает эффективность каланхоэ против пигментных пятен;
  • Регулярное применение косметики с экстрактом каланхоэ лечит, очищает и отбеливает кожу.

Купить каланхоэ масляный экстракт

Купить лучшие компоненты для создания косметики и ингредиенты для мыла ручной работы оптом и в розницу возможно на нашем сайте.

Права на текст принадлежат https://мыло-опт.com.ua

UV ESSENTIEL Защита | CHANEL

ПРОДУКТ

Выбирайте для кожи новое средство комплексного воздействия. В дополнение к защите от излучения (коротких волн УФА, длинных волн УФB и комнатного освещения) средство UV ESSENTIAL SPF 50 содержит два мощных натуральных компонента: экстракт Каланхоэ PFA* и экстракт дрожжей пустынного кактуса. Они усиливают естественную способность кожи противостоять агрессивным факторам окружающей среды и свободным радикалам, а также поддерживать оптимальный уровень увлажнения.
Уникальная чувственная текстура сочетает в себе легкость геля и комфортность крема. Ваша кожа надолго сохранит молодость и сияние.

*PFA: полифракционирование активных веществ. Особый способ экстракции, изобретенный CHANEL для получения сверхчистых активных компонентов.

Действие

Комплексная защита для сохранения молодости кожи. Кожа мгновенно увлажняется, становится свежей и сияющей, идеально подготовленной к нанесению макияжа.

ОСНОВНЫЕ ИНГРЕДИЕНТЫ

В составе UV ESSENTIAL 3 мощных ингредиента комплексной защиты:

. СОЛНЕЧНЫЕ ФИЛЬТРЫ SPF 50:
Мощные солнечные фильтры защищают кожу от воздействия УФ-лучей спектра А и В, а также от внутреннего освещения. SPF 50 обеспечивает очень высокую защиту даже при ярком солнце.

. ЭКСТРАКТ КАЛАНХОЭ PFA:
Экстракт Каланхоэ PFA получен из растения, выращиваемого на Мадагаскаре и способного выживать при экстремальном воздействии ультрафиолета. Мощный антиоксидант, этот экстракт помогает коже противостоять окислительному стрессу.

. ЭКСТРАКТ ДРОЖЖЕЙ ПУСТЫННОГО КАКТУСА:
Экстракт дрожжей пустынного кактуса снижает последствия воздействия агрессивных факторов окружающей среды и стимулирует естественные защитные механизмы кожи, укрепляя кожный барьер и помогая поддерживать оптимальный уровень увлажнения.

СПОСОБЫ НАНЕСЕНИЯ

В завершение ежедневного ритуала ухода за кожей наносите средство на все лицо, шею и зону декольте перед тем, как приступить к макияжу. В случае пребывания на солнце для комплексной защиты на протяжении всего дня регулярно возобновляйте нанесение.

Лекарственное растение каланхое Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

УДК 615.322

ЛЕКАРСТВЕННОЕ РАСТЕНИЕ КАЛАНХОЕ

КАРОМАТОВ СУХРОБ ИНОМДЖАНОВИЧ — студент Бухарского государственного медицинского института

Аннотация

В статье приводится обзор научной литературы по медицинскому использованю каланхоэ.

Ключевые слова: каланхоэ, Kalanchoe pinnata, лекарственные растения.

MEDICINAL PLANT KALANHOE

KAROMATOV SUHROB INOMDJANOVICH — student of Bukhara state medical institute

ABSTRACT

The review of the scientific literature happens to In article on medical use kalanhoe.

The Keywords: kalanhoe, Kalanchoe pinnata, medicinal plants.

Kalanchoe pinnata L. Растение встречается в диком виде в тропической Африке, на острове Мадагаскар, Канарских островах. В странах СНГ это комнатное растение культурно выращивается в

условиях теплиц. Растение применяется в современной научной медицине.

Химический состав: Растение содержит флавоноиды, флавоноидные гликозиды, дубильные вещества, кверцетин, кемпферол ди гликозид- капиннатозид, органические кислоты, полисахариды, ферменты, витамины С, Р — [20, р.2077]. В растении много солей А1, Мд, Са, Си — [5, с.178; 4, с.21].

В африканской народной медицине каланхоэ применяют для лечения заболеваний почек, атеросклероза, простуды — [16, р.45].

Растение используется очень широко в научной медицине в виде свежего сока, мазей — [2, с.60]. Определены антиоксидантные свойства сока каланхоэ — [7, с.119]. Можно растение применить и в домашних условиях. Для этого пропускают листья одно- двухлетнего растения через мясорубку, дают осесть осадку и применяют наружно в виде повязок, для лечения гнойных, незаживающих ран. При ринитах капают в нос сок каланхое, по 2-3 капли 3 раза в день.

Сок каланхоэ используют также для спринцевания при воспалительных заболеваниях женских половых органов. Широко препараты каланхоэ применяются в стоматологической практике — [3, с.141; 6, с.148].

Испытания пероральных препаратов растения показали его гепатопротективное воздействие — [23, р.201; 1, с.414].

Определено противоопухолевое воздействие брифиллина каланхоэ — [22, р.949]. На экспериментальных мышах получены положительные результаты при лечении препаратами каланхоэ лейшманиоза — [13, р.210; 14, р.582; 19, р.83; 20, р.2077; 15, р.618].

Экспериментальные исследования выявили антиконвульсантные свойства метанольных экстрактов листьев каланхоэ — [18, р. 168].

Прием препаратов каданхоэ увеличивает секрецию инсулина поджелудочной железой — [21, р.1418]. Экспериментальные исследования водных экстрактов каланхоэ выявили его терапевтические свойства при сахарном диабете 2 типа — [17, р.88]. Благодаря ранозаживляющим свойствам, препараты каланхоэ эффективны при лечении диабетической стопы — [9, p.213].

Выявлены антигипертензивные свойства водных экстрактов каланхоэ — [8, р.407].

Водные экстракты цветков калахоэ обладают выраженной Т супрессивной активностью — [10, p. 17].

Экспериментальные исследования на животных показали наличие иммуномодуляторных, противоаллергических свойств у растения — [11, p.1621; 12, p.121]. Использованная литература

1. Багинская А.И., Лескова Т.Е. К истории применения сока каланхое как лекарственного средства — Химия, Технология, Медицина — Международная конференция, посвященная 75-летию образования Всероссийского научно-исследовательского института лекарственных и ароматических растений. М. 2006, 411-414.

2. Буряк М.В., Хохленкова Н.В. Физико-химические исследования мази на основе густого экстракта коры дуба и сока каланхоэ -GISAP, Medical Science, Pharmacology, 2013, 2, 59-60.

3. Ващенко Е.С., Кулешова С.А., Компанцева Е.В., Компанцев Д.В., Маринина Т.Ф. Разработка технологии и изучение противовоспалительного действия стоматологического геля на основе глюкозамина с соками крапивы и каланхоэ — Курский

научно-практический вестник «Человек и его здоровье» 2009, 1, 136141.

4. Волжанова М.И., Байльман Р.А., Суслина С.Н., Быков В.А. Каланхоэ перистое и дегремона: химический состав, применение в медицине (обзор) — Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии 2010, 8, 7, 14-21.

5. Ловкова М.Я., Рабинович А.М. и др. Почему растения лечат М., Наука 1990.

6. Маринина Т.Ф., Савченко Л.Н., Саушкина А.С. Изучение возможности комплексного использования растения каланхоэ перистое — Известия Самарского Научного Центра Российской Академии Наук 2015, 17, 5-1, 143-148.

7. Сажина Н.Н., Лапшин П.В., Загоскина Н.В., Короткова Е.И., Мисин

B.М. Сравнительный анализ антиоксидантной активности соков каланхое — Химия растительного сырья- 2013, з, 113-119.

8. Bopda O.S., Longo F., Bella T.N., Edzah P.M., Taiwe G.S., Bilanda D.C., Tom E.N., Kamtchouing P., Dimo T. Antihypertensive activities of the aqueous extract of Kalanchoe pinnata (Crassulaceae) in high salt-loaded rats — J. Ethnopharmacol. 2014, Apr 28, 153(2), 400-407.

9. Cawich S.O., Harnarayan P., Budhooram S., Bobb N.J., Islam S., Naraynsingh V. Wonder of Life (kalanchoe pinnata) leaves to treat diabetic foot infections in Trinidad & Tobago: a case control study -Trop. Doct. 2014, Oct., 44(4), 209-213.

10. Coutinho M.A., Muzitano M.F., Cruz E.A., Bergonzi M.C., Kaiser

C.R., Tinoco L.W., Bilia A.R., Vincieric F.F., Rossi-Bergmann B., Costa S.S. Flowersfrom Kalanchoe pinnata arearichsource of Tcell-suppressive flavonoids -Nat. Prod. Commun. 2012, Feb., 7(2), 175178.

11. Cruz E.A., Da-Silva S.A., Muzitano M.F., Silva P.M., Costa S.S., Rossi-Bergmann B. Immunomodulatory pretreatment with Kalanchoe pinnata extract and its quercitrin flavonoid effectively protects mice against fatal anaphylactic shock — Int. Immunopharmacol. 2008, Dec 10, 8(12). 1616-1621.

12. Cruz E.A., Reuter S., Martin H., Dehzad N., Muzitano M.F., Costa S.S., Rossi-Bergmann B., Buhl R., Stassen M., Taube C. Kalanchoe pinnata inhibits mast cell activation and prevents allergic airway disease — Phytomedicine 2012, Jan 15, 19(2), 115-121.

13. Da Silva S.A., Costa S.S., Mendonca S.C., Silva E.M., Moraes V.L., Rossi-Bergmann B. Therapeutic effect of oral Kalanchoe pinnata leaf extract in murine leishmaniasis — Acta. Trop. 1995, 60(3), 201-210.

14. Da Silva S.A., Costa S.S., Rossi-Bergmann B. The anti-leishmanial effect of Kalanchoe is mediated by nitric oxide intermediates -Parasitology 1999 Jun., 118 (Pt 6), 575-582.

15. Gomes D.C., Muzitano M.F., Costa S.S., Rossi-Bergmann B. Effectiveness of the immunomodulatory extract of Kalanchoe pinnata against murine visceral leishmaniasis — Parasitology 2010, Apr., 137(4), 613-618.

16. Lans C.A. Ethnomedicines used in Trinidad and Tobago for urinary problems and diabetes mellitus — J. Ethnobiol. Ethnomed. 2006, Oct. 13, 2, 45.

17. Menon N., Sparks J., Omoruyi F.O. Oxidative Stress Parameters and Erythrocyte Membrane Adenosine Triphosphatase Activities in Streptozotocin-induced Diabetic Rats Administered Aqueous Preparation of Kalanchoe Pinnata Leaves — Pharmacognosy Res. 2016, Apr-Jun., 8(2), 85-88.

18. Mora-Pérez A., Hernández-Medel M.D. Anticonvulsant activity of methanolic extract from Kalanchoe pinnata Lam. stems and roots in mice: A comparison to diazepam — Neurologia 2016, Apr., 31(3), 161168.

19. Muzitano M.F., Cruz E.A., de Almeida A.P., Da Silva S.A., Kaiser C.R., Guette C., Rossi-Bergmann B., Costa S.S. Quercitrin: an antileishmanial flavonoid glycoside from Kalanchoe pinnata — Planta. Med. 2006, Jan., 72(1), 81-83.

20. Muzitano M.F., Tinoco L.W., Guette C., Kaiser C.R., Rossi-Bergmann B., Costa S.S. The antilei-shmanial activity assessment of unusual flavonoids from Kalanchoe pinnata — Phytochemistry 2006, Sep., 67(18), 2071-2077.

21. Patil S.B., Dongare V.R., Kulkarni C.R., Joglekar M.M., Arvindekar A.U. Antidiabetic activity of Kalanchoe pinnata in streptozotocin-induced diabetic rats by glucose independent insulin secretagogue action — Pharm. Biol. 2013, Nov., 51(11), 1411-1418.

22. Supratman U., Fujita T., Akiyama K., Hayashi H., Murakami A., Sakai H., Koshimizu K., Ohigashi H. Antitumor promoting activity of bufadienolides from Kalanchoe pinnata and K. daigremontiana x tubiflora — Biosci Biotechnol. Biochem. 2001, Apr., 65(4), 947-949.

23. Yadav N.P., Dixit V.K. Hepatoprotective activity of leaves of Kalanchoe pinnata Pers. — J. Ethnopharmacol. 2003, Jun., 86(2-3), 197-202.

НАСТОЙКА КАЛАНЧЕВОГО

НАСТОЙКА КАЛАНЧЕГО

Обзор
Каланхоэ (Bryophyllum pinnatum) — суккулентное многолетнее растение, произрастающее в Южной Америке. Завод имеет
темно-зеленые мясистые очередные листья.
Из-за множества эффективных лекарственных средств его также называют воздушным растением , чудом света или чудо-листом .Он имеет множество свойств и действий в Суринама Традиционная медицина .
Используется против мигрени, головных болей и воспалений; листья прикладывают к фурункулам, язвам и
кожные и желудочные язвы.
Измельченные листья имеют кисловатый вкус и мягкий вкус; они используются для астмы ; свежий сок листьев
используется для лечения бронхита, , других инфекций верхних дыхательных путей, и коклюша.
Каланхоэ обладает активными противовирусными соединениями ; снижает лихорадку и может оказывать противовоспалительное, болеутоляющее и мышечное
расслабляющие эффекты.
Это также известно в аюрведической системе индийской медицины; сок свежих листьев используется эффективно
для лечения желтухи .

Составляющие
Доступны следующие фитохимические вещества: алкалоиды, кардиенолиды, тритерпены, гликозиды, флавоноиды,
стероиды, кверцетин, кемпферол, щавелевая кислота, буфадиенолиды, липиды и другие, такие как жирные кислоты и минералы.

Фармакология
Буфадиенолиды — это группа стероидных гормонов, они обладают антибактериальными, кардиоактивными,
противоопухолевые, противораковые и инсектицидные действия.Эти соединения включают бриофиллин А
которые показали сильную противоопухолевую активность. Также включены берсальдегенин-3-ацетат и бриофиллин C.
Соединения бриофиллина обладают выраженной противораковой терапевтической ценностью против раковых клеток. Берсальдегенин-1,3,5-ортоацетат
подавляет рост раковых клеток на нескольких линиях рака.

Было показано, что экстракт листьев растения значительно задерживает начало
Лейшманиоз у мышей при заражении Leishmania amazonensis. Кверцетин был идентифицирован как активное начало. Он обладает антиоксидантным и противовоспалительным действием и является мощным
антилейшманиальный флавоноид .
Эффективность иммуномодулирующего экстракта растения также была продемонстрирована против висцерального
лейшманиоз на мышиной модели заражения Leishmania chagasi.
Сок листьев и спиртовой экстракт исследовали на крысах против CCI-индуцированной
гепатотоксичность. Испытуемый материал оказался гепатопротекторным.
Цветки K. pinnata являются богатым источником Т-супрессорных флавоноидов , которые могут быть терапевтически полезными.
против воспалительных заболеваний .

При респираторных заболеваниях экстракты листьев полезны при лечении острого и хронического бронхита,
пневмония, бронхиальная астма и сердцебиение.

Приложения
Применяется против головных болей, болей в спине, болей (антиноцицептивное действие) и ревматизма.
Против инфекций верхних дыхательных путей (URTI’s ), работает против вирусных, бактериальных и грибковых инфекций. Против
лейшманиоз; гепатопротекторный. Настойка действует на варикозного расширения вен ,
стимулирует кровообращение и гипертонию . Его также можно наносить местно на раны, фурункулы и укусы насекомых.

Дозировка
Настойка: 1 2 раза в день.

Взаимодействия
Может усиливать действие иммунодепрессантов; противопоказан людям, страдающим аллергией.
Каланхоэ , а не следует применять во время беременности.

Артикул

Нутрицевтики при респираторных заболеваниях
Кавита Гулати, Арунабха Рэй 2016


Представленная выше презентация предназначена только для информационных и образовательных целей.
Это
основано на научных исследованиях (на людях, животных или in vitro), клиническом опыте или традиционном использовании.
Для многих из
При обсуждении условий возможно также лечение назначенными (RX) или безрецептурными лекарствами (OTC).
Проконсультируйтесь со своим врачом, практикующим и / или фармацевтом по поводу любых проблем со здоровьем и перед использованием пищевых добавок.
или перед внесением каких-либо изменений в назначенные лекарства.

Чтобы узнать правильную ставку фрахта, посетите наш Интернет-магазин на странице !

Настойка каланхоэ пинната (Bryophyllum Pinnatum), жидкий экстракт сушеных листьев и стеблей

Настойка каланхоэ пинната (Bryophyllum Pinnatum), жидкий экстракт сушеных листьев и стеблей

, Жидкий экстракт из стеблей и сушеных листьев
  • Мы произвели этот экстракт, используя метод холодной мацерации, чтобы гарантировать полное извлечение и сохранение широкого спектра лечебных растительных соединений — витаминов, минералов, алкалоидов, флавоноидов и других активных компонентов трав.
  • Искусно извлечено в соответствии со строгими стандартами качества и процедурами из сушеных листьев и стеблей каланхоэ пинната. Мы тщательно производим наши экстракты в соответствии с точными стандартами, где каждая трава извлекается в соответствии с отличительными характеристиками каждого растения!
  • Суперконцентрированная настойка каланхоэ пинната: соотношение сухого растительного материала / менструального цикла составляет 1: 3! Скорость экстракции: 1 мл экстракта соответствует примерно 330 мг сушеной травы!
  • Мы производим жидкие экстракты ТОЛЬКО из натуральных ингредиентов! Все травы выращиваются органически, собираются в дикой природе или выборочно импортируются.Наши экстракты не содержат ГМО, глютен, искусственные красители, тяжелые металлы, консерванты, пестициды и удобрения!
  • Произведено в США на предприятии, зарегистрированном FDA, под строгим лабораторным контролем.
  • Bryophyllum pinnatum, также известный как растение воздуха, колокольчики собора, растение жизни, чудо-лист и растение Гете, — это суккулентное растение, произрастающее на Мадагаскаре, которое является популярным комнатным растением и прижилось в тропических и субтропических регионах. Он отличается обилием миниатюрных проростков, которые образуются на краях его филлоклад, что у него общего с некоторыми другими представителями его рода.*

    Основные ингредиенты: Основной ингредиент: Каланхоэ пинната (Bryophyllum Pinnatum) Сухие листья и стебель. Менструация: спирт, растительный пальмовый глицерин, кристально чистая вода. Не содержит: ГМО, глютена, искусственных красителей, тяжелых металлов, консервантов, пестицидов, удобрений.

    Сила: Сухой растительный материал / соотношение растворителей 1: 3

    Менструальный цикл на спиртовой основе: дважды дистиллированный сертифицированный органический или фармацевтический спирт, пищевой глицерин из пальмовых овощей.

    Менструальный цикл без спирта: овощной пальмовый пищевой глицерин, очищенная кристально чистая вода.

    Не содержит: ГМО, глютен, искусственные красители, тяжелые металлы, консерванты, пестициды, удобрения.

    Показания: Не использовать, если пломба сломана или отсутствует.

    Информация о безопасности: Хранить в недоступном для детей месте. Не использовать во время беременности. Перед применением проконсультируйтесь с врачом, если кормите грудью или принимаете какие-либо лекарства. Не используйте, если у вас аллергия на какие-либо ингредиенты. Не используйте, если пломба сломана или отсутствует. Хранить в прохладном сухом месте.

    Рекомендуемое использование и дозировка: Перед использованием хорошо взболтать. Принимайте примерно 10-15 капель на 2 унции сока или воды до 4 раз в день.

    Эти утверждения не были проверены Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов. Этот продукт не предназначен для диагностики, лечения или предотвращения каких-либо заболеваний. Фактическая упаковка и материалы продукта могут содержать больше и отличаться от информации, представленной на нашем веб-сайте. Мы рекомендуем проконсультироваться с врачом перед применением этой или любых других травяных добавок.Сделано на предприятии, зарегистрированном FDA.

    Фитохимический и фармакологический обзор

    Quazi Majaz A. et al / IJRAP 2011, 2 (5) 1478-1482

    Международный журнал исследований аюрведы и фармации

    Противоязвенная активность

    Этанольный экстракт проявляет активность против острых язв, тогда как водный экстракт

    не предотвращал образование поражений слизистой оболочки желудка

    , вызванных индометацином41.

    Мочегонное и противоуролитическое действие

    Водно-спиртовой экстракт листьев Kalanchoe pinnata

    (Crassulaceae) вводили самцам крыс линии Wistar перорально и

    внутрибрюшинно в дозах 100 300 500 и 800 мг / кг.

    Эффект выделения мочи определяли путем сравнения объема

    мочи, собранного при содержании отдельного животного в метаболических клетках.

    Противоуролитический эффект определяли путем сравнения

    уровней электролитов в моче, биохимических параметров и гистологии почек с

    контрольными животными и животными, получавшими стандартное лекарственное средство.Было обнаружено, что экстракты растений

    обладают значительной диуретической и противоуролитической активностью. 39

    Гепатопротекторная активность

    За активность брали сок листьев (концентрированный) и этанольную фракцию сока

    (EX). Для оценки активности были взяты как in vitro, так и in vivo модель

    .

    Гепатотоксичность, вызванная хлороформом, обусловлена ​​его метаболитом

    ccl3 ∙ свободным радикалом, который связывается с липопротеином и приводит к окислению липидов эндоплазматического ретикулума.Результатом этого эксперимента

    является снижение уровня билирубина заводским концентратом

    до 105,50% и снижение уровня SGPT на концентрат

    и EX до 92,47 и 87,43% соответственно. Эти данные

    вместе с гистопатологическими исследованиями ясно показывают гепатопротекторную активность

    каланхоэ пинната33.

    Иммуномодулирующий эффект

    самцов мышей BALB / c и крыс Lou-M были использованы для экспериментов

    и подсчет эозинофилов, OVA-специфический igE, пролиферация Т-клеток,

    продукция цитокинов, анализ высвобождения гистамина и т. Д. Параметры были рассмотрены как

    . результаты показывают, что экстракт растений и его флавоноиды Quercetin

    эффективно защищают мышей от анафилактического шока34.

    Нефропротекторная активность

    Харлалка и др. Сообщают, что водный экстракт листьев каланхоэ

    пиннаты обладает мощным нефропротективным действием против гентамицина.

    индуцировал нефротоксичность у крыс и антиоксидантную активность in vitro37.

    Нейроседативная и миорелаксантная активность

    Солевой экстракт листьев растения был исследован на нейрофармакологическую активность

    , чтобы подтвердить заявления о местном применении.Когда

    испытывали на мышах, он вызывал дозозависимое удлинение начала

    и продолжительности гипноза, индуцированного пентобарбиталом, уменьшение исследовательской активности

    в тестах с наклоном головы и уклонением. Более того, координация мышц, зависящих от дозы

    , наблюдалась в тестах на наклонный экран

    , тягу и лазание. Он отсрочил начало судорог у

    приступов, индуцированных как стрихнином, так и пикротоксином, в дополнение к минимальной защите от приступов пикротоксина

    30.

    Релаксант матки

    Bryophyllum pinnatum демонстрирует релаксантный эффект in vitro на сократительную способность миометрия человека

    и усиливает сократимость матки, индуцированную фенотеролом

    (Спонтанное сокращение, сокращение стимулированное окситоцином

    ). 38

    Активность заживления ран

    Действие экстракта листьев каланхоэ пинната, а именно. петролейный эфир

    (PE), спиртовой экстракт (AE) и водный экстракт (WE) при заживлении,

    иссечение, разрез и рана мертвого пространства у крыс-альбиносов была исследована

    .Все три экстракта показали значительное увеличение прочности разреза на разрыв

    . Сухой вес ватных шариков и содержание гидроксипролина

    в грануляционной ткани по сравнению с контрольными группами

    , и они показали значительное увеличение сокращения раны

    и образование рубцов на 17-й день после ранения. Результат

    показывает, что МЫ ускорили процесс заживления открытых ран,

    , но весь вводимый экстракт систематически способствовал заживлению

    ран после разрезов.26

    ПРЕПАРАТЫ, ПРОДАВШИЕСЯ НА ПРОДАЖУ

    1 Амантол — крем

    Заболевания верхних дыхательных путей, синусит, бронхит, аллергические реакции,

    состояния, связанные с закупоркой носовых ходов. Состав:

    Экстракт Mentha viridist (мята), экстракт ирезина дифуса (эсканель),

    экстракт Lippia alba (янтрия), экстракт Zingiber officinalis (имбирь),

    экстракт каланхоэ пиннаты (Pakipanga), экстракт Mansia alliacea (ajo

    ).

    de monte), ментол, альканфор, вода, кремовая основа.Внешнее использование

    только 43

    2 Parnabija svarasa — против ожирения 44

    ЗАКЛЮЧЕНИЕ

    Каланхоэ пинната — суккулент, который был завезен во многие умеренные и тропические регионы мира как

    декоративное растение. В некоторых из этих регионов этот вид широко натурализован и считается инвазивным. Образует густые насаждения на засушливых

    и нарушенных участках. Каланхоэ богато алкалоидами, тритерпенами,

    гликозидами, флавоноидами, стероидами и липидами.Листья содержат

    группу химических веществ, называемых буфадиенолидами, которые очень активны, и

    вызвали интерес ученых. По структуре и активности

    они очень похожи на два других сердечных гликозида, дигоксин и

    дигитоксин (препараты, используемые для клинического лечения застойной сердечной недостаточности

    и связанных состояний). В клинических исследованиях было продемонстрировано

    буфадиенолидов каланхоэ, которые обладают антибактериальным, противоопухолевым, противоопухолевым, противораковым и инсектицидным действием.Обычно используется лист,

    сок листьев и все растение, корневая часть еще не исследована

    , поэтому необходимо провести дальнейшие исследования для оценки его химической и

    фармакологической активности. Поскольку мы обнаруживаем, что клинические испытания на заводе

    еще не завершены, завод может быть исследован для клинических исследований.

    СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

    1. Киртикар К.Р. И Басу Б.Д., Индийские лекарственные растения с иллюстрациями. Том-5,

    издание второе, Предприятия Востока.2003: 1394-1396.

    2. Богатство Индии Словарь Индии по сырьевым материалам и промышленности

    продуктов, (Том-5) (H -K) Серия первых дополнений, Национальный институт

    Научные коммуникации и информационные ресурсы, Совет научных и

    Industrial Research, Нью-Дели; 1997: 31.

    3. plant.usda.gov

    4. www.raintree. com

    5. Нандкарни А.К., Indian Materia Medica, Volume-1, Third edition, Popular

    Prakashan, Bombay, 2005: 1402 & 221.

    6. ​​Самим Софика Бегум и Раджиб Джого, Травяной рецепт, приготовленный во время Бохага или

    Ронгали Биху в Ассаме, Индийский журнал традиционных знаний, 2007; 6 (3):

    417-422.

    7. S Huissain и DK Hore, Коллекционирование и сохранение основных лекарственных растений

    из Дарджилинга и Сиккима, Индийский журнал традиционных знаний, 2007; 6 (2):

    352-357.

    8. Прабал Сен, Михин Долло, Манабендра Датта Чаудхури, Дхрупад Чоудхури,

    Документация и традиционные знания о травах Камптиса из Аруначала

    Пардеш, 2008; 7 (3): 438-442.

    9. Сантош Кумар Даш и Сачиданда Падхи, обзор этаномедицинских препаратов для лечения диареи

    из Ориссы: распространенность по сравнению с культурой, Journal Hum. Ecol.

    2006; 20 (1): 59-64

    10. Черли А. Ланс, Этаномедицины, используемые в Тринидаде и Тобаго для лечения проблем с мочеиспусканием

    и сахарного диабета, Журнал этнобиологии и этномедицины,

    2006; 2:45.

    11. MJ Bhandary, KR Chandrashekar, KM Kaveriappa, Medical Ethanoibotany of

    Siddis of Uttara Kannada District, Карнатака, Индия, Журнал

    Ethanopharmacology, 1995; 47: 149-158.

    12. Май Тхань Тхи Нгуен, Суреш Авале, Ясухиро Тезука, Куан Ле Тран, Хироши

    Ватанабе и Шигетоши Кадота, ингибирующая активность ксантиноксидазы I

    Вьетнамских лекарственных растений, Biol.Pharm.Bull. 2004; 27 (9): 1414-1521.

    13. Шиддамаллая Н., Азра Ясмин и Гопакумар К., Медико-ботаническое исследование

    Кумара Парватха Кукке Субраманья, Манглор, Карнатака, Индийский журнал

    традиционных знаний, 2010; 9 (1): 96-99.

    14. Md. Shahadat hossan, Abu Hanif, Mujib Khan, Sazzadul Bari, Rownak jahan,

    Мохаммад Рахематулла, Этаноботаническое исследование племени Трипура в

    Бангладеш, Американо-евразийский журнал устойчивого сельского хозяйства, 3

    (2): 253-261.

    15. Донатус Эбере Окву и Ннамди Фред Ученна, Экзотическое многогранное лекарственное средство

    Растения фармацевтической и фармацевтической промышленности, Африканский журнал биотехнологии,

    2009; 8 (25): 7271-7282.

    16. В. К. Джайн, Д. П. Шах и Н. М. Патель, Микроскопические и предварительные фитохимические исследования

    на листьях Bryophyllum Pinnatum, Journal of Pharmacy Research,

    2008; 1 (2): 230-232.

    АНТИМИКРОБНЫЙ ПОТЕНЦИАЛ ИЗ ЛИСТОВ ПИННАТЫ КАЛАНЧЕЙ

    ПРОТИВОМИКРОБНЫЙ ПОТЕНЦИАЛ ИЗ ЛИСТОВ ПИННАТЫ КАЛАНЧЕЙ

    Абстрактные

    Фитотерапия означает использование семян, ягод, корней, листьев, коры или цветов любого растения в лечебных целях. Каланхоэ пинната известно как лекарственное средство на травах, обладающее многими особыми преимуществами. Целью исследования была научная оценка антимикробной активности 95% этанола, метанола, 60% метанола и водного экстракта листьев Kalanchoe pinnata на Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, и Candida albicans. Было обнаружено, что 60% -ный метанольный экстракт показывает лучший результат. 60% метанольные экстракты листьев выбранных растений были взяты в разном соотношении случайным образом, и были проведены антимикробные тесты.Затем определяли наиболее эффективную концентрацию путем сравнения результатов зоны ингибирования. Был проведен фитохимический скрининг 60% метанольного экстракта, и минимальная ингибирующая концентрация (МИК), минимальная бактерицидная концентрация (МБК) была обнаружена значительной активностью против микроорганизмов. Обзор литературы показывает, что листья этого растения обладают только антибактериальной активностью. Но это исследование позволило сделать вывод, что листья растений обладают не только антибактериальной, но и противогрибковой активностью.

    Sr №:
    13

    № страницы:
    4577-4580

    Размер:
    300 КБ

    Скачать:
    1725

    Цитируется:
    13

    Язык:
    Английский

    Лицензия:
    IJPSR

    Авторы:
    Сима В.Паттевар *, Дипак Н. Патил и С. Б. Дахикар

    Адрес авторов:
    Институт фармации и исследований Сандживани, Копаргаон-423601, Махараштра, Индия

    Эл. адрес:
    [email protected]

    Полученный:
    09 июля, 2013

    Пересмотрено:
    23 августа, 2013

    Принято:
    17 ноября, 2013

    DOI:
    http: // dx.doi.org/10.13040/IJPSR.0975-8232.4(12).4577-80

    Опубликовано:
    01 декабря 2013

    Скачать

    Ингибирующее действие гидроэтанольных экстрактов листьев Kalanchoe brasiliensis и Kalanchoe pinnata (Crassulaceae) на местные эффекты, вызванные змеиным ядом Bothrops jararaca

    Профиль ТСХ гидроэтанольных экстрактов

    Для фитохимического анализа с помощью ТСХ экстракты фракционировали разделением жидкость-жидкость для получения фракций с разной полярностью, что облегчало хроматографический анализ соединений.

    Анализ с помощью ТСХ показал большое разнообразие фенольных соединений с различиями между HE и фракциями K . brasiliensis и K . pinnata (рис S2). Оранжевый цвет при обнаружении с помощью NP Reagent и наблюдении в УФ-365 нм K . brasiliensis соединений указывают на присутствие флавоноидов, вероятно, со скелетом патулетина. Желтые цвета K . pinnata соединений указывают на присутствие флавоноидных соединений, вероятно, с кверцетиновым скелетом [39].

    Профиль гидроэтанольных экстрактов ВЭЖХ-ДАД-МС и ВЭЖХ-ДАД-МС / МС

    Хроматографические отпечатки пальцев, полученные HPLC-DAD-MS и HPLC-DAD-MS / MS HE из K . brasiliensis и K . pinnata изображены на рис. 1. Можно заметить, что K . pinnata имеет более простой хроматографический профиль по сравнению с K . brasileinsis , а также наблюдали при анализе ТСХ.

    Рис. 1. Хроматограммы ВЭЖХ-ДАД-МС K . brasiliensis (A) и K . pinnata (B) Экстракты HE.

    Экстракты хроматографировали на колонке Phenomenex RP-18 (250 x 4,6 мм, 5 мкм), и колонку элюировали градиентом ацетонитрила (ACN) в 3% уксусной кислоте при скорости потока 0,7 мл / мин. Профиль элюирования контролировали при 340 нм. Пики 6-8, 11-17, 22 и 23 считались основными пиками на панели A, а пики 4 и 11-13 считались основными пиками на панели B.

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0168658.g001

    Хроматографический профиль HPLC-DAD HE из K . brasiliensis (рис. 1A) демонстрирует по крайней мере десять основных пиков, большинство из которых имеют УФ-спектры, аналогичные гликозилированным производным флавоноидов из патулетина, таким как патулетин 3 -O -гликозид (261 и 270 нм полоса II и 355 нм I полосу) [44]. Выделение и характеристика производных патулетина описаны [9]. Недавно мы идентифицировали гликозид патулетина K . brasiliensis как патулетин 3- O -α-L-рамнопиранозил-7- O -α-L-рамнопиранозид [45]. На фиг. 1A это изолированное соединение было идентифицировано как пик седьмой (7) из-за сравнения его профиля фрагментации и стандартного анализа.

    На хроматограмме НЕ из К . pinnata (рис. 1B) наблюдали по крайней мере четыре основных пика в УФ-области 340 нм. Большинство из них имели УФ-спектры, аналогичные гликозилированным флавоноидам, производным кверцетина, таким как кверцитрин (полоса 256 и 265 нм II и полоса 355 нм I) [44].Выделение гликозидов, полученных из кверцитина и кемпферола, было ранее описано в K . pinnata листа [13, 14, 46].

    В экстрактах листьев обоих видов в гидроэтаноле основные соединения, идентифицированные с помощью HPLC-DAD-MS и HPLC-DAD-MS / MS, соответствуют флавоноидам-O -гликозидам (таблицы S1 и S2). Обнаруженные агликоны представляли собой флавон эупафолин и флавонолы патулетин, кверцетин и кемпферол, причем последние были идентифицированы только в листьях K . пинната . Конъюгированные сахара с этими структурами представляют собой гексозы (в виде глюкозы), пентозы (в виде арабинозы) и дезоксигексозы (в виде рамнозы). Соединения идентифицировали с помощью основания в данных УФ, масс-спектрах ионов-предшественников и ионного продукта в режиме MS 1 , MS 2 и MS 3 .

    MS 3 позволила нам выделить ион агликона при m / z на 333 (относительно структуры патулетина), и полная схема путей фрагментации была описана в дополнительном материале (файл S1).Как и ожидалось, реакции фрагментации начинаются с отщепления радикала метильной группы, хорошо определяемого вычислительными методами [47, 48]. Классические реакции Ретро-Дильса-Альдера для флавоноидов [49] не наблюдались с высокой интенсивностью (менее 10% от общего количества ионов) из-за преобладания радикального перевооружения, дающего ключевые фрагментные ионы. Химический состав газовой фазы полностью соответствует предложенной структуре агликона. Таблицы S1 и S2 показали идентифицированные флавоноиды- O -гликозиды, а анализ MS 3 для всех агликонов m / z на 333 подтверждает тот же путь фрагментации, подтверждая ядро ​​патулетина.Для эупафолина ожидалось такое же начальное удаление радикалов, и спектры MS 3 иона агликона ( m / z при 317) подтверждают гипотезу (см. Схему 2 в дополнительном материале — файл S1). Путь фрагментации согласуется с аналогом эупафолина, и единственной новой реакцией было радикальное элиминирование • H, которое происходит после элиминирования CO. Возникновение этого исключения присуще образованию с открытой или закрытой оболочкой, например, анион-радикала или аниона, ранее описанных для изофлавоноидов, подтвержденных вычислительными методами [48].Анализ MS3 относительно агликонов кверцетина и кемпферола согласуется с ранее опубликованными данными фрагментации.

    Оценка антиофидной активности гидроэтанольного экстракта

    Исследования, оценивающие антиофидную активность видов каланхоэ , очень скудны в литературе. На сегодняшний день только два исследования с К . Было обнаружено, что brasiliensis демонстрируют его ингибирующий потенциал против B . alternatus и B . jararaca отек и кожное кровоизлияние, вызванные змеиным ядом [5, 11]. Однако никакие исследования не сравнивали способности K . brasiliensis и K . pinnata для защиты от местного воздействия B . jararaca , что важно отметить, поскольку оба растительных вида взаимозаменяемы в народной медицине как противофидные, в основном из-за большого морфологического сходства видов [7]. Таким образом, в связи с этим в настоящей статье было оценено ингибирующее действие обоих видов растений на местные эффекты, возникающие в результате отравления.

    Фосфолипазы змеиного яда A 2 (PLA 2 s) представляют собой класс кальций-зависимых ферментов и представляют собой суперсемейство липолитических ферментов, которые специфически катализируют гидролиз сложноэфирной связи в положении sn-2 глицерофосфолипидов, что приводит к образование жирных кислот (арахидонат) и лизофосфолипидов [50, 51]. Помимо своей каталитической функции, PLA 2 s проявляют фармакологические активности, которые могут зависеть или не зависеть от каталитических свойств.Геморрагическая, миотоксическая, гемолитическая, отечная и нейротоксическая активность была приписана PLA 2 , в результате эти ферменты участвовали во многих токсических и фармакологических эффектах, наблюдаемых при отравлении змеями [51, 52, 53].

    Результаты показывают, что оба экстракта способны ингибировать активность фосфолипазы, индуцированную B . яд jararaca (рис 2). Однако модель K . pinnata HE экстракт был более эффективным, поскольку при соотношении яд: экстракт 1:25 (мас. / Мас.) Активность PLA 2 полностью подавлялась, а K . brasiliensis полностью ингибировал активность PLA 2 только в соотношении, в четыре раза большем (таблица 1). Эти результаты предполагают, что оба экстракта могут содержать соединения, способные ингибировать активность PLA 2 с K . pinnata экстракт более сильнодействующий.

    Фиг. 2. Ингибирование активности PLA 2 B . яд jararaca гидроэтанольным экстрактом из K . brasiliensis (Kb) (A) и K . pinnata (Kp) (B).

    Точки представляют собой среднее значение ± SEM (n = 3). Обратите внимание, что полосы ошибок меньше символов.

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0168658.g002

    Тесты для оценки in vivo ингибирования местных эффектов, индуцированных B . яд харараки проводили по двум протоколам лечения: предварительная обработка, когда экстракт вводили перед инъекцией яда, и последующая обработка, когда экстракт вводили животным после отравления.Использование лекарственных растений в качестве профилактических средств от укусов змей у мышей уже было продемонстрировано, например, в [54]. Это исследование показало, что R . Экстракты alpinia , вводимые за три дня до инъекции яда, ингибировали летальную активность B . Яд asper , вводимый мышам внутрибрюшинно. Таким образом, предварительная обработка может быть особенно полезна в эндемичных регионах, а также для сельских рабочих, которые более подвержены укусам змей, которые могут использовать этот ресурс в качестве альтернативы и / или в дополнение к лечебному подходу.Кроме того, использование протокола предварительной обработки в доклинических исследованиях полезно, чтобы избежать ложноотрицательных результатов, которые могут существовать из-за фармакокинетики тестируемого препарата (например, низкая эффективность из-за низкой скорости абсорбции). С другой стороны, протокол экспериментов до лечения не мог в определенной степени отражать эффективность экстракта при введении после отравления. Имея это в виду, после оценки эффективности экстрактов в протоколе предварительной обработки, были проведены новые эксперименты для оценки эффективности экстрактов при их использовании после отравления с целью моделирования практического / клинического использования растения. извлекать.Постобработка — интересный метод оценки нейтрализующей способности ингибитора, так как он близок к практической клинической ситуации [55, 56]. В этом подходе животные получали экстракты в течение 5 мин внутрибрюшинно. маршрут после введения змеиного яда.

    Ореол местного кожного кровоизлияния — важный эффект отравления ботропом [26]. Таким образом, растения, которые могут уменьшить местное геморрагическое действие яда, представляют большой интерес для лечения местных эффектов, вызванных укусом змеи.Как показано на фиг. 3, оба экстракта, i.p. В ходе предварительной обработки были способны ослабить геморрагический ореол, производимый ядом. А также по активности фосфолипазы K . pinnata был немного более активен, чем K . brasiliensis , в основном в отношении дозы 125 мг / кг, как показано в таблице 1. Фактически, появление геморрагического ореола явно уменьшалось, что указывает на потенциальную возможность K . brasiliensis и K . pinnata экстракты листьев при лечении местного кровоизлияния, производимые B . джарарака яд.

    Рис. 3. Подавление геморрагической активности B . яд jararaca (BjV) по экстрактам K . brasiliensis (Kb) (A) и K . pinnata (Kp) (B) в протоколе предварительной обработки.

    BjV был введен п / к в вентральной области мышей, предварительно обработанных i.p. с разными дозами экстрактов.Через три часа после инъекции яда кожу удаляли и взвешивали. Столбцы представляют собой среднее значение ± SEM (n = 5). * <0,05 и ** p <0,01 по сравнению с одним ядом (однофакторный дисперсионный анализ с последующим тестом Тьюки).

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0168658.g003

    В протоколе после лечения не наблюдалось статистических различий между массой геморрагического ореола в период после отравления (рис. 4). С другой стороны, содержание гемоглобина было значительно снижено примерно на 30% в группах, получавших HE K . pinnata , как показано на рис. 5. В этом протоколе эффект был немного хуже, вероятно, из-за фармакокинетических проблем, таких как короткое время для абсорбции, потому что используемая модель очень быстро развивается. Этот результат усиливает потенциальные возможности растений как многообещающего агента укуса змеи.

    Рис. 4. Подавление геморрагической активности B . яд jararaca (BjV) по экстрактам K . brasiliensis (Kb) (A) и K . pinnata (Kp) (B) в протоколе после лечения.

    BjV был введен п / к в вентральной области 5 мышей перед лечением экстрактом (500 мг / кг, внутрибрюшинно). Через три часа после инъекции яда кожу удаляли и взвешивали. Столбцы представляют собой среднее значение ± SEM (n = 5). *** p <0,001 по сравнению с одним ядом (однофакторный дисперсионный анализ с последующим тестом Тьюки).

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0168658.g004

    Рис. 5. Ингибирование B . jararaca (BjV) вызванное ядом накопление гемоглобина экстрактами K . brasiliensis (Kb) (A) и K . pinnata (Kp) (B) в протоколе после лечения.

    Процент представленной активности рассчитывали как: [(содержание гемоглобина у животных, получавших яд плюс экстракт ÷ содержание гемоглобина у животных, получавших только яд) x 100]. Значения выражены как среднее ± SEM (n = 5). * p <0,05 и *** p <0,001 по сравнению с одним ядом (BjV) (100% активности) (однофакторный дисперсионный анализ с последующим тестом Тьюки).

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0168658.g005

    Зная, что локальное кровотечение является важным эффектом ботропного отравления, и учитывая, что местное геморрагическое действие вызывается геморрагическим (геморрагическим) действием SVMP [28] , результаты показывают, что экстракты обладают ингибирующей активностью по отношению к этим токсинам. Интересно, что K . Экстракт pinnata в протоколе после лечения был способен снижать содержание гемоглобина, что указывает на его антигеморрагическую активность.Однако он не смог подавить вес геморрагического ореола. Это открытие может привести нас к двум возможностям: во-первых, возможно, экстракт способен влиять на некаталитические сайты SVMP, ответственные за свойства адгезивов, влияя в основном на литическую активность этих ферментов как таковых, и, учитывая вторую возможность, возможно, что оба Методики количественной оценки кровоизлияния (масса геморрагического ореола и содержание гемоглобина) показали различную чувствительность, что повлечет за собой множество различных реакций.

    Антигеморрагическая активность водного экстракта K . brasileinsis листьев предварительно инкубировали с B . Яд jararaca был недавно описан с ингибированием примерно на 40% диаметра внутрикожного геморрагического ореола [5].

    Ботропное отравление также характеризуется быстрым развитием отека и воспаления в месте инокуляции ядом [26]. Отечная активность, по-видимому, является результатом комбинированного действия различных токсинов (Asp49 или Lys49 PLA 2 и геморрагических или негеморрагических металлопротеиназ змеиного яда), быстро индуцирующих высвобождение эндогенных медиаторов воспаления [57].Модуляция эндогенными медиаторами часто снижает эффективность противоядия, поскольку, хотя противоядие может нейтрализовать токсины, оно не может уменьшить воспаление, вызванное биохимическими медиаторами, высвобождаемыми ими [33]. Таким образом, соединения с противовоспалительной активностью считаются потенциальными адъювантами в противоядной терапии для лечения местных эффектов, вызванных укусом [58].

    Как видно на рис. 6, K . brasiliensis не способен подавлять отек, вызванный B . jararaca , даже при максимальной испытанной дозе. С другой стороны K . pinnata (рис. 6) при наивысшей дозе демонстрирует значительный противоотечный эффект (p <0,001) с аналогичным эффектом с противовоспалительным контрольным препаратом дексаметазоном (p> 0,05). Эта тенденция продолжается и в протоколе после лечения, в котором K . pinnata был так же эффективен в подавлении отека, как и стандартный противовоспалительный дексаметазон (рис. 7).

    Рис. 6. Ингибирование отечной активности B . яд jararaca (BjV) по экстрактам K . Brasiliensis (Kb) (A) и K . pinnata (Kp) (B) в протоколе предварительной обработки.

    BjV был введен i.pl. в правой задней лапе мышей, предварительно обработанных i.p. с разными экстрактами. Толщину лапы измеряли в течение 120 мин после введения яда. Отек выражали как увеличение толщины лапы, рассчитанное как процентное различие между толщиной лапы после (в соответствующее время) и до (базальные значения) инъекции яда.Точки представляют собой среднее значение ± SEM (n = 5). * p <0,05, ** p <0,01 и *** p <0,001 по сравнению с группой, получавшей только яд вместе с внутрибрюшинным введением. инъекция 5% касторового масла в PBS (двухфакторный дисперсионный анализ с последующим тестом Бонферрони).

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0168658.g006

    Рис. 7. Ингибирование отечной активности B . яд jararaca (BjV) по экстрактам K . brasiliensis (Kb) (A) и K . pinnata (Kp) (B) в протоколе после лечения.

    BjV был введен i.pl. в правой задней лапе мышей за 5 мин до обработки экстрактом (500 мг / кг, внутрибрюшинно). Толщину лапы измеряли в течение 120 мин после введения яда. Отек выражали как увеличение толщины лапы, рассчитанное как процентное различие между толщиной лапы после (в соответствующее время) и до (базальные значения) инъекции яда. Точки представляют собой среднее значение ± SEM (n = 5). * p <0,05 и ** p <0.01 по сравнению с группой, получавшей только яд вместе с i.p. инъекция 5% касторового масла в PBS (двухфакторный дисперсионный анализ с последующим тестом Бонферрони).

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0168658.g007

    Анализ MPO в наивысшей испытанной дозе K . pinnata был способен ингибировать 55,4% активности MPO, в то время как HE K . brasiliensis во всех исследованных дозах не оказал значительного воздействия (рис. 8 и таблица 1).То же самое произошло в протоколе постобработки, в котором К . pinnata был так же эффективен в ингибировании MPO ядом, как и стандартное лечение (Рис. 9), подтверждая процентное уменьшение толщины лапы. Это значительное ингибирование активности МПО указывает на то, что противоотечный эффект, проявляемый экстрактом, может быть связан с ингибированием миграции клеток, поскольку этот фермент является количественным маркером притока воспалительных клеток в ткань лапы, инъецированной ядом [43, 59].

    Рис 8. Влияние экстрактов К . brasiliensis (Kb) (A) и K . pinnata (Kp) (B) на уровни МПО при отеке лапы, вызванном B . яд харака (BjV) в протоколе предварительной обработки.

    LP: левая лапа (базальный контроль; без введения яда, экстракта или дексаметазона). УМПО: единица МПО, определяемая как эквивалент потребления 1 мкмоль перекиси водорода в минуту. Столбцы представляют собой среднее значение ± SEM (n = 5), ** p <0.01 и *** p <0,001 по сравнению с контрольной группой (внутрибрюшинная инъекция BjV с внутрибрюшинным введением 5% касторового масла в PBS) после теста Тьюки (однофакторный дисперсионный анализ ANOVA с последующим тестом Тьюки).

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0168658.g008

    Рис. 9. Влияние экстрактов K . brasiliensis (Kb) (A) и K . pinnata (Kp) (B) на уровни МПО при отеке лапы, вызванном B . яд jararaca (BjV) в протоколе после лечения.

    LP: левая лапа (базальный контроль; без введения яда, экстракта или дексаметазона). УМПО: единица МПО, определяемая как эквивалент потребления 1 мкмоль перекиси водорода в минуту. Столбцы представляют собой среднее значение ± SEM (n = 5), * p <0,05 по сравнению с контрольной группой (внутрибрюшинная инъекция BjV с внутрибрюшинным введением 5% касторового масла в PBS) (однофакторный дисперсионный анализ ANOVA с последующим анализом Тьюки тестовое задание).

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0168658.g009

    Относительно K . pinnata , наблюдаемая здесь противовоспалительная активность подтверждается литературой, в которой водный и этанольный экстракты K . pinnata оказались эффективными в подавлении отека лап, вызванного каррагинаном, и отека ушей, вызванного кротоновым маслом [14, 15]. Помимо флавоноидов, были идентифицированы и выделены другие вторичные метаболиты растений из K . pinnata , например терпены, стероиды и буфадиенолиды. Таким образом, модель K .Противовоспалительная активность pinnata объясняется синергизмом флавоноидов, тритерпенов и стероидов [15].

    По данным литературы, лечение животных соком, полученным из листьев К . brasiliensis уменьшал толщину лапы, инфильтрацию лейкоцитов и кровоток в области лапы при воспалении, вызванном зимозаном [10]. Другое исследование показало, что водный экстракт К . brasiliensis был эффективен в подавлении отека лапы, вызванного каррагенаном [19].Исследование, проведенное Fonseca et al. [11] показали, что местное применение водного экстракта надземной части К . brasiliensis у мышей значительно ослаблял отечную, некротическую и геморрагическую активность яда Bothrops alternatus . Однако наши результаты с K . brasiliensis показал, что он не обладает значительной противоотечной активностью в отношении B . jararaca змеиный яд, даже в самой высокой дозе.Некоторые факторы могут мешать действию экстракта против отека, например, тип экстракта (в предыдущих исследованиях использовались сок или водные экстракты листьев, в то время как в настоящей работе использовался гидроэтанольный экстракт) и используемый способ введения (некоторые исследования использовали пероральный или местный путь, тогда как в настоящей работе использовался внутрибрюшинный путь).

    В нашем исследовании химический профиль показывает, что флавоноиды являются основными вторичными метаболитами в сырье и экстрактах из K . brasiliensis и K . пинната . Согласно литературным данным, присутствие флавоноидов может быть особенно интересным для антиофидных растений, поскольку эти соединения способны стимулировать прочные водородные связи с амидами белковых цепей и проявлять хелатирующую активность с металлами, а также обладают сильным противовоспалительным и антиоксидантным действием [28 , 36]. Фактически, несколько исследований показывают, что флавоноиды (такие как апигенин, морелофлавон, кверцетин, лютеолин и другие) обладают способностью ингибировать SVMP, PLA 2 s и гиалуронидазы, очищенные из ядов змей, демонстрируя сильные ингибирующие эффекты против ядовитых заболеваний. местные эффекты [60, 61, 62, 63, 64, 65].Итак, большое количество флавоноидов в сырье и экстрактах К . brasiliensis и K . pinnata экстрактов может оправдать, по крайней мере частично, ингибирующую активность, представленную этими экстрактами. Однако, учитывая, что экстракты представляют собой сложную смесь различных химических групп, многие другие активные компоненты в этих экстрактах могут быть задействованы, действуя по разным механизмам против нескольких различных токсинов в змеином яде. Фактически, во многих случаях целые экстракты трав более эффективны, чем травяные соединения [56].Поэтому необходимы дальнейшие исследования, чтобы убедиться в этом на изученных видах.

    экстракт листьев каланхоэ пинната,

    -05-2

    экстракт листьев каланхоэ пинната, -05-2

    Спонсоры поставщиков

      Название: Экстракт листьев каланхоэ пинната
      Номер CAS: -05-2
      ECHA Номер ЕС: 289-972-7
      FDA UNII: Поиск

      Категория: маскирующие вещества

      США / ЕС / FDA / JECFA / FEMA / FLAVIS / Ученый / Патентная информация:

      Физические свойства:

      Пищевые химикаты Перечислены в Кодексе:

      Органолептические свойства:

      Описание запаха и / или вкуса от других лиц (если обнаружено).

      Косметическая информация:

      Поставщиков:

      Информация по безопасности:

      .
      Идентификация опасностей
      Классификация вещества или смеси
      GHS Классификация в соответствии с 29 CFR 1910 (OSHA HCS)

      GHS Элементы маркировки, включая меры предосторожности
      Пиктограмма
      Заявление об опасности
      Меры предосторожности
      Не найдено.
      Оральная / парентеральная токсичность:
      Не определено
      Токсичность для кожи:
      Не определено
      Токсичность при вдыхании:
      Не определено

      Информация о безопасности использования:

      Ссылки по безопасности:

      EPA ACToR: токсикологические данные
      EPA Substance Registry Services (SRS): Registry
      Национальный институт аллергии и инфекционных заболеваний: данные
      kalanchoe extract 05

      Артикулы:

      Экстракт листьев каланхоэ пинната
      Pubchem (sid): 135308598

      Другая информация:

      Примечание о потенциальных блендерах и основных компонентах

      Возможное использование:

      Возникновение (природа, еда, прочее): примечание.

      Синонимы:

      912листов 51
      Экстракт листьев воздушного растения
      Экстракт листьев bryophyllum pinnatum
      Экстракт листьев занавесно-растительного происхождения
      floppers 9125 9125 9125

      floppers 9125 Экстракт листьев удачи
      Экстракт листьев живого растения
      Экстракт листьев мексиканского растения любви
      Экстракт листьев чудо-листьев

      Статей:

      Не найдено

    Противовирусная способность экстракта листьев Kalanchoe gracilis против энтеровируса 71 и вируса Коксаки A16

    Пандемическая инфекция или повторное появление энтеровируса 71 (EV71) и вируса Коксаки A16 (CVA16) происходит в тропических и субтропических регионах и ассоциируется с ящуром , герпангина, асептический менингит, энцефалит ствола головного мозга, отек легких и паралич.Однако эффективные терапевтические препараты против EV71 и CVA16 встречаются редко. Kalanchoe gracilis (L.) DC используется для лечения травм, боли и воспалений. В этом исследовании изучали противовирусное действие экстракта листьев K. gracilis на репликации EV71 и CVA16. Анализ ВЭЖХ с обращенно-фазовой колонкой C-18 показал, что профили отпечатков пальцев экстракта листьев K. gracilis имели 15 хроматографических пиков. Спектры поглощения в УФ / видимой области выявили пики 5, 12 и 15 феруловой кислоты, кверцетина и кемпферола, соответственно. Экстракт листьев K. gracilis проявлял небольшую цитотоксичность, но проявлял зависящую от концентрации противовирусную активность, включая цитопатический эффект, снижение образования зубного налета и вирусов. Экстракт листьев K. gracilis продемонстрировал более сильное противовирусное действие, чем феруловая кислота, кверцетин и кемпферол, значительно подавляя репликацию in vitro EV71 ( μ, г / мл) и CVA16 ( μ, г / мл). мл). Более того, экстракт листьев K. gracilis является безопасным противоэнтеровирусным агентом с инактивацией вирусной протеазы 2A и снижением экспрессии IL-6 и RANTES.

    1. Введение

    Kalanchoe gracilis (L.) DC, «Да-Хуан-Хун» по-китайски, это традиционное китайское лекарственное растение, принадлежащее к семейству Crassulaceae , народной медицине, обычно используемой для лечения травм, боль, жар и воспаление на Тайване [1, 2]. Экстракты K. gracilis содержат большое количество полифенолов и флавоноидов, которые могут проявлять потенциальную антиоксидантную, противовоспалительную и антипролиферативную активность [2, 3]. Выявленные компоненты включают кумарин, буфадиенолиды, флавоноиды (например,g., теолин, кверцетин, кверцитрин, кемпферол и эупафолин) и гликозидные производные эупафолина [4, 5]. Последний является жизненно важным биологически активным соединением, обладающим антиоксидантным и противовоспалительным действием в клетках RAW264.7, обработанных липополисахаридом, а также антипролиферативным действием в отношении клеток HepG2 [3]. Сообщается, что соединения на основе кумарина обладают противовирусной активностью против гепатита С и вируса иммунодефицита человека 1 (ВИЧ-1) [6–10]. Ранее сообщалось, что соединения на основе 3-фенилкумарина связываются с вирусным белком R (Vpr) и ингибируют Vpr-зависимую репликацию ВИЧ в макрофагах человека [10].Chiang et al. [7] также доказали, что менее 1 мкл М синтетического аналога бис- или тетра-кумарина необходимо наполовину для подавления интеграции ВИЧ-1. Сообщается, что флавоноиды обладают широким спектром противовирусной активности, эффективно ингибируя репликацию риновируса человека, полиомиелита Сэбина 2 типа, гепатита А, вируса Коксаки В4 и эховируса 6 [11–14]. Экстракт Kalanchoe farinacea , другого вида из семейства Crassulaceae , показал противовирусную активность против гриппа A и вируса простого герпеса типа 1 in vitro [15].Буфадиенолиды, идентифицированные из листьев двух других растений Crassulaceae , Kalanchoe pinnata и K. daigremontiana x tubiflora , ингибируют активацию раннего антигена вируса Эпштейна-Барр в клетках Raji [16]. Вместе с данными о противовирусных свойствах родственных соединений и растений Crassulaceae , K. gracilis представляет собой ценный источник противовирусных агентов.

    Энтеровирусы (EV) являются членами семейства Picornaviridae , которые имеют общую черту 7.Геном одноцепочечной позитивно-смысловой РНК размером 4 т.п.н. [17]. Геном энтеровируса кодирует один большой полипротеин, расщепляемый энтеровирусными протеазами 2A и 3C. После синтеза белка вирусные полипротеины расщепляются на четыре капсида (от VP1 до VP4) и семь неструктурных белков (2A, 2B, 2C, 3A, 3B, 3C и 3D). Многие важные патогены — это энтеровирусы: например, полиовирусы, вирус Коксаки A (CVA) и B (CVB), эховирус EV68, EV69, EV70, EV71. CVA и EV71 являются независимыми этиологическими агентами ящура, миокардита, глазного конъюнктивита, герпангины, асептического менингита или тяжелых неврологических осложнений, таких как энцефалит и полиомиелитоподобный паралич [18].В частности, энцефалит ствола головного мозга, вызванный EV71, имеет плохой прогноз с высокой летальностью [19]; Вспышки EV71 были зарегистрированы в странах Западной части Тихого океана, Швеции и Австралии [19–22]. Такие эпидемии на Тайване вызвали 78 смертей в 1998 г. [23–26], 25 смертей в 2000 г. и 26 смертей в 2001 г. [21]. Важно отметить, что коциркуляция EV71 и CVA возникает при серьезных вспышках HFMD в Китае, Тайване и Малайзии [26–28]. На Тайване вирус Коксаки A16 (CVA16) является основным серотипом изолятов CVA, выявленных во время вспышек HFMD [26, 28].Глобальная программа вакцинации против полиовируса планирует искоренить полиовирусные заболевания, такие как тяжелый полиомиелит, во всем мире; однако ни один противовирусный препарат не был одобрен FDA для лечения инфекции EV. Стратегия профилактики или лечения инфекции EV оказывается очень важной, особенно для EV71 и CVA16.

    В этом исследовании изучали противовирусную активность in vitro экстракта листьев K. gracilis против EV71 и CVA16 с использованием моделей in vitro при предварительной обработке перед адсорбцией вируса, одновременной обработке во время инфекции и последующей обработке после адсорбции вируса.Все показали значительно меньшую вирусную репликацию in vitro ; лечение на ранних и поздних стадиях показало сильное торможение. В этом исследовании также изучались возможные противовирусные механизмы: например, ингибирование активности in vitro и клеточной протеазы 2A, противовоспалительное действие на экспрессию вирус-индуцированных воспалительных генов, активация p38 MAPK, ERK1 / 2 и NF- κ B сигнальные пути.

    2. Материалы и методы
    2.1. Вирусы и клетки

    ,

    EV71 и CVA16 были получены из клинических изолятов в лаборатории клинической вирусологии больницы Китайского медицинского университета в Тайчжуне, Тайвань.Клетки RD (номер доступа АТСС CCL-136) выращивали в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM; Gibco) с 10% фетальной бычьей сывороткой (FBS; Gibco). Все среды были дополнены 100 ед. / Мл пенициллина и стрептомицина и 2 мМ L- глутамина. Клетки HeLa-G2AwtR были получены из клеток HeLa, содержащих плазмиду pG2AwtR, которая кодирует зонд FRET, а также гибридный белок красного флуоресцентного белка (DsRed) — мотив расщепления 2Apro — зеленый флуоресцентный белок (GFP), как описано Tsai et al.[29]. Клетки культивировали в модифицированной среде Игла (MEM; Gibco) с 10% FBS и 20 мкг г / мл зеоцина.

    2.2. Приготовление

    K. gracilis Экстракт сока листьев

    K. gracilis был собран с сельскохозяйственных угодий и садов в округе Цзяи, Тайвань, как описано в Флора Тайваня и идентифицирован профессором Синь-Фу Йен из Национального музея естествознания. Наука в Тайчжуне, Тайвань. Свежие листья K. gracilis подвергали холодному отжиму, полученный сок листьев фильтровали через ватман No.1 бумагу, затем лиофилизировали в сублимационной сушилке (IWAKI FDR-50P). Этот порошок экстракта сока листьев хранился в стерильных флаконах и хранился в морозильной камере -20 ° C.

    2.3. Анализ отпечатков пальцев с помощью ВЭЖХ

    Для анализа профилей отпечатков пальцев ВЭЖХ отфильтрованный экстракт листа K. gracilis из этилацетатного слоя или смесь маркеров феруловой кислоты, кверцетина и кемпферола (10 мкл, л) вводили непосредственно в ВЭЖХ. прибор (Shimadzu LC-10A) с обращенно-фазовой колонкой C-18.Феруловая кислота была приобретена у Sigma-Aldrich Chemical Co (Сент-Луис, Миссури, США). Кверцетин был приобретен у компании Alfa Aesar-A Johnson Matthey. Кемпферол был приобретен в компании Extrasynthese (Франция). Разделение проводили с градиентным элюированием 0,25% муравьиной кислоты и ацетонитрила (40% между 0 и 9 мин, 40-60% между 9 и 30 мин) при скорости потока 0,8 мл / мин. Хроматографические пики детектировали при 260/360 нм с помощью детектора 2996 PDA.

    2.4. Анализ жизнеспособности клеток

    Для определения жизнеспособности клеток RD клетки культивировали в течение ночи на 96-луночных планшетах.Добавляли среду, содержащую 0, 1, 50, 250, 500 или 1000 мкл г / мл экстракта листьев K. gracilis , и инкубировали в течение 24 и 48 часов с последующим анализом МТТ. Выживаемость клеток рассчитывалась как отношение оптической плотности при 570-630 нм () обработанных клеток к необработанным клеткам. Для каждой концентрации анализировали пять дубликатов лунок. Данные представляют собой средние значения ± стандартное отклонение трех независимых экспериментов. Цитотоксическая концентрация 50% токсического эффекта (CC 50 ) была определена с использованием компьютерной программы (предоставленной Джоном Спугом, Национальный центр биотехнологической информации, Национальные институты здравоохранения).Феруловая кислота, кверцетин и кемпферол в концентрациях 1, 10, 50, 100 и 500 мкг г / мл также были протестированы на цитотоксичность.

    2,5. Анализ снижения цитопатического эффекта (CPE)

    клеток RD (4 × 10 5 клеток RD на лунку) высевали в 6-луночный планшет. На следующий день EV71 или CVA16 при множественности инфицирования (MOI) 1 смешивали со средой Игла, модифицированной Дульбекко, содержащей только 2% FBS, или средой с 100 мкг г / мл экстракта листьев K. gracilis перед добавлением к среде. Клетки RD инкубировать 24 и 48 ч при 37 ° C.Морфологию клеток наблюдали и фотографировали под микроскопом.

    2.6. Анализ уменьшения бляшек

    клеток RD (4 × 10 5 клеток RD на лунку) высевали в 6-луночные планшеты. На следующий день клетки инфицировали EV71 или CVA16 (100 БОЕ) в отсутствие или в присутствии экстракта листьев K. gracilis в концентрации 10, 50 или 100 мкг мкг / мл или соединения-маркера (кверцетин, феруловая кислота, и кемпферол) при 0,1, 1, 10 и 50 μ г / мл 1 ч при 37 ° C. Затем на клетки наносили 2 мл среды, содержащей 3% агарозы, и инкубировали в течение 2 дней при 37 ° C в инкубаторе CO 2 .По окончании инкубации клетки окрашивали 0,1% кристаллическим фиолетовым. Феруловая кислота, кверцетин и кемпферол в концентрациях 0,1, 1, 10 и 50 мкг г / мл также были протестированы на уменьшение зубного налета. Затем определяли концентрации, которые снижали количество бляшек на 50% (IC 50 ). Терапевтический индекс (ТИ) определялся соотношением CC 50 к IC 50 .

    2.7. Анализ вирулицидной активности

    EV71 или CVA16 (10 4 БОЕ) смешивали с тестируемыми соединениями различных концентраций (0, 50 и 100 мк г / мл) или средой и инкубировали в течение 30 минут при комнатной температуре, затем последовательно разведения смеси проводили с использованием анализа налета.Остаточную инфекционность измеряли, как описано в анализе бляшек.

    2,8. Анализы выхода вируса и времени добавления

    Экстракт листьев K. gracilis добавляли к клеткам RD до (30-минутная предварительная обработка), во время (одновременная обработка) и после (30-минутная после обработки) вирусных инфекций EV71 и CVA16. при титре 300 БОЕ. Через 48 часов после заражения собирали культуральную среду и экстрагировали геномы РНК с помощью мини-набора QIAamp Viral RNA Mini (Qiagen). ОТ-ПЦР в реальном времени выполняли со специфическими праймерами, основной смесью SYBR green PCR Master Mix и красителем, связывающим дцДНК SYBR green I.Олигонуклеотиды для VP1 представляли собой прямой праймер 5′-GGCCCCTGAATGCGGCTAATCC- (нуклеотиды 458-480) и обратный праймер 5′-GCGATTGTCA CCATWAGCAGYCA-3 ‘(нуклеотиды 603-581), как описано в отчете Oberste et al. [30]. Уровень продукта ПЦР контролировали с помощью системы обнаружения последовательностей ABI PRISM 7000 (Applied Biosystems). Для сравнения вирусной РНК-нагрузки в культуральной среде значение дельта Ct было рассчитано путем вычитания значения Ct для вирусной нагрузки в культуральной среде инфицированных клеток, обработанных экстрактом листьев K. gracilis , из значения Ct для вирусной нагрузки в культивируемых клетках. среды инфицированных клеток без обработки.Если значение дельта Ct было больше 3,3, что указывает на 50 мкл г / мл экстракта листьев K. gracilis имел более чем 1-логарифмическое снижение (равное 90% эффективной концентрации [EC 90 ]) в вирусной РНК. нагрузки.

    2.9. Анализ флуоресцентного резонансного переноса энергии (FRET)

    Клетки HeLa-G2AwtR (1 × 10 6 клеток на лунку), экспрессирующие зонд FRET, высевали в 6-луночные планшеты для тканевых культур и инфицировали EV71 или CVA16 (1 × 10 6 БОЕ).Через 1 ч адсорбции посевной материал аспирировали и 200 мкл л модифицированной среды Игла, содержащей только 2% FBS, или среду с 1, 10, 50, 100 или 150 мк г / мл K. gracilis экстракт листьев добавляли в каждую лунку. Клетки собирали через 48 часов после заражения, а лизаты переносили в 96-луночные планшеты для флуоресценции. Интенсивность флуоресценции зондов FRET измеряли с помощью считывающего устройства для флуоресцентных планшетов с длиной волны возбуждения 390/20 нм (для GFP 2 при 510/10 нм) и длиной волны излучения 590/14 нм (для DsRed2). в котором DsRed2 возбуждался испусканием GFP 2 на длине волны 510/10 нм.Представленные данные представляют собой средние значения трех независимых экспериментов, а полосы ошибок представляют собой стандартные отклонения.

    2.10. Конструирование, экспрессия и очистка протеазы EV71 2A

    Ген, кодирующий протеазу EV71 2A, амплифицировали с помощью ПЦР с кДНК изолята EV71 CMUH01. Для C-концевого His- меченая протеаза.Продукты ПЦР расщепляли BamHI и XhoI, и фрагмент ДНК клонировали в pET24a (Novagen). Затем плазмиду, содержащую ген протеазы, трансформировали в E. coli Origami B (DE3) (Novagen) для экспрессии белка. 10 мл ночной культуры одной колонии использовали для инокуляции 400 мл свежей среды LB, содержащей 25 мкг г / мл канамицина. Клетки выращивали до A600 0,6 и индуцировали 1 мМ IPTG. После индукции IPTG в течение ночи клетки собирали центрифугированием при 6000 об / мин в течение 30 мин, а затем ресуспендировали в денатурирующем буфере (10 мМ имидазол, 8 М мочевина и 1 мМ β -меркаптоэтанол) перед обработкой ультразвуком.Разделение супернатанта проводили в колонке Ni-NTA, и His-меченой протеазе 2A давали возможность медленно ренатурировать путем градиентной промывки буфером для рефолдинга (10 мМ имидазол и 1 мМ β -меркаптоэтанол) в течение ночи. Наконец, рекомбинантную протеазу 2А элюировали 25 мМ трис-HCl, pH 7,5, 150 мМ NaCl и 300 мМ имидазолом. Концентрацию очищенного белка определяли с помощью анализа белка Bio-Rad.

    2.11.

    In Vitro Анализ активности протеазы 2A

    В анализе активности протеазы протеаза 2A была разработана для взаимодействия с пероксидазой хрена (HRP).HRP представляет собой коммерчески доступный субстрат, и его пары Leu-Gly в остатках 122-123 соответствуют сайту расщепления протеазой 2A. Чтобы исследовать наиболее подходящую концентрацию протеазы 2A для взаимодействия с HRP, каждую добавляли протеазы 2A с различными концентрациями в диапазоне от 1 мкл мкг / мл до 150 мкл мкг / мл и инкубировали с 1 мкг мкг / мл HRP в течение 2 ч при 37 ° C. Затем смеси проявляли с помощью ABTS / H 2 O 2 и измеряли при OD 405 .Экстракт листа K. gracilis тестировали на активность протеазы против EV71 2A, поэтому его инкубировали с HRP в течение 2 ч при 37 ° C в 96-луночных планшетах in vitro . Оставшуюся активность HRP в каждой реакции определяли с хромогенным субстратом ABTS / H 2 O 2 , а интенсивность проявленного цвета измеряли при 405 нм. Процент ингибирования активности протеазы EV71 2A рассчитывали по следующему уравнению:

    2,12. Количественная оценка экспрессии провоспалительного гена с использованием ОТ-ПЦР в реальном времени

    Полную РНК выделяли из клеток RD с обработкой или без обработки K.gracilis и с вирусной инфекцией или без нее с помощью набора для очистки (система очистки общей РНК PureLink Micro-to-Midi, Invitrogen). кДНК синтезировали из 1000 нг общей РНК с использованием праймера oligo dT и набора обратной транскриптазы SuperScript III (Invitrogen). Чтобы измерить экспрессию в ответ на обработку экстракта листьев K. gracilis и / или вирусную инфекцию, использовали двухэтапную ОТ-ПЦР с использованием SYBR Green I. Следующие пары олигонуклеотидных праймеров были использованы в настоящем исследовании для обнаружения цитокинов, включая (1) прямой праймер 5′-TCCCCATATTCCTCGGAC-3 ‘и обратный праймер 5′-GATGTACTCCCGAACCCA-3′ для RANTES человека, (2) прямой праймер 5 ′ -ATGCCCCAAGCTGAGAACCAAGACCCA-3 ′ и обратный праймер 5′-TCTCAAGGGGCTGGGTCAGCTATCCCA-3 ′ для человеческого IL-10, (3) прямой праймер 5′-GATGGATGCTTCCAATCTGGAT-3 ′ и обратный праймер 5′-AGTTCTCCATAC-3 ′ для человеческого IL-10; (4) прямой праймер 5’-CTCTAGAGCACCATGCTACAGAC-3 ‘и обратный праймер 5′-TGGAATCCAGGGGAAACACTG-3’ для человеческого IL-1 α и (5) прямой праймер 5′- CATGCGTTTCCGTTACAAGTGCGA-3 ‘и обратный праймер TGGGTGCGTCTTAGTGGTATCTGT-3 ‘для человеческого NF- κ B.Кроме того, мРНК глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (GAPDH), ген домашнего хозяйства, измеряли с использованием 5′-AGCCACATCGCTCAGACAC-3 ‘и 5′-GCCCCA ATACGACCAAATCC-3’ в качестве прямого и обратного праймеров. Реакционная смесь для ПЦР в реальном времени содержала 2,5 мкл л кДНК (смесь для обратной транскрипции), 200 нМ каждого праймера в мастер-миксе SYBR Green I (LightCycler TaqMAn Master, Roche Diagnostics). ПЦР выполняли по протоколу амплификации, состоящему из 1 цикла при 50 ° C в течение 2 минут, 1 цикла при 95 ° C в течение 10 минут, 40 циклов при 95 ° C в течение 15 секунд и 60 ° C в течение 1 минуты.Конкретные продукты были амплифицированы и обнаружены в системе определения последовательности ABI PRISM 7700 (PE Applied Biosystems), и относительные изменения в уровнях мРНК указанных генов были нормализованы геном домашнего хозяйства GAPDH.

    2.13. Вестерн-блоттинг

    RD-клетки инфицировали вирусом (8 × 10 5 БОЕ) в присутствии или в отсутствие экстракта листьев K. gracilis . Лизатные белки клеток RD растворяли в 2x буфере для образцов SDS-PAGE без 2-меркаптоэтанола, кипятили в течение 10 мин и затем разделяли на 8% гелях SDS-PAGE перед переносом на нитроцеллюлозную бумагу.Полученные блоты блокировали 5% обезжиренным молоком, затем реагировали с должным образом разведенными моноклональными антителами, включая анти-ERK1 / 2, анти-фосфо-ERK1 / 2, анти-p38 MAPK, анти-фосфо-p38 MAPK, анти-p65, анти-фосфо. -p65, анти-каспаза 9 (Cell Signaling Technology) и анти- β -актин. Иммунные комплексы выявляли с использованием козьих антител против IgG мыши, конъюгированных с пероксидазой хрена, с последующей реакцией усиленной хемилюминесценции (Amersham Pharmacia Biotech).

    2.14.

    In vivo Anti-EV71 Assay

    Однодневным мышам-сосункам внутрибрюшинно инокулировали EV71 (1.7 × 10 5 БОЕ) и внутрибрюшинно вводили экстракта листьев K. gracilis (0, 1, 2 мг / кг) один раз на 1, 3, 5, 7 день после инфицирования. По 3 мыши из каждой группы были умерщвлены на 2, 4, 6 и 8 день. Были собраны образцы кишечника для обнаружения вирусных нагрузок с использованием ОТ ПЦР в реальном времени.

    2,15. Статистический анализ

    ANOVA-анализ с использованием программы SPSS (версия 10.1, SPSS Inc., Иллинойс, США) или тест Шеффе использовали для анализа всех данных. P значение меньше 0.05 считался статистически значимым.

    3. Результаты
    3.1. Профилирование отпечатков пальцев экстракта листьев

    K. gracilis

    Для определения отпечатка пальца экстракта листьев K. gracilis с помощью ВЭЖХ были проанализированы этилацетатный слой отфильтрованного экстракта листьев и маркерные компоненты феруловой кислоты, кверцетина и кемпферола. с колонкой с обращенной фазой C-18 (рис. 1). Время удерживания составило 5,74 мин для феруловой кислоты, 12,13 мин для кверцетина и 20 мин.44 мин для кемпферола при 360 нм (рис. 1 (а)). Хроматографические пики ВЭЖХ экстракта листьев K. gracilis из этилацетатного слоя показали, что времена удерживания пиков 5, 12 и 15 идентичны таковым для феруловой кислоты, кверцетина и кемпферола, соответственно (рис. 1 (b)). УФ-спектры поглощения (200–360 нм) пиков 5, 12 и 15 были идентичны по сравнению с маркерными компонентами феруловой кислоты, кверцетина и кемпферола, соответственно (рис. 1 (c)). ВЭЖХ и УФ-анализ поглощения выявили профили отпечатков пальцев, а также компоненты производителя при температуре K.gracilis экстракт листьев.

    3.2. Цитотоксичность экстракта листьев

    K. gracilis в клетках RD

    Для оценки цитотоксичности экстракта листьев K. gracilis клетки RD обрабатывали экстрактом листьев K. gracilis в диапазоне концентраций 1–1000 мк г / мл. Анализ цитотоксичности In vitro показал, что экстракт листьев K. gracilis не был цитотоксичным для клеток RD в диапазоне концентраций 1–500 мкг г / мл через 24 и 48 ч после обработки (рис. 2).Концентрации 50% цитотоксичности (CC 50 ) феруловой кислоты, кверцетина и кемпферола были все выше, чем 500 мкг г / мл, как и у экстракта листьев K. gracilis (данные не показаны). Результаты также продемонстрировали, что экстракт листьев K. gracilis менее цитотоксичен по сравнению с тремя компонентами-маркерами.

    3.3. Ингибирующее действие экстракта листьев

    K. gracilis на репликацию EV71 и CVA16

    Противовирусное действие K.gracilis против EV71 и CVA16 дополнительно оценивали вирулицидную активность, снижение цитопатического эффекта (CPE), уменьшение вирусных бляшек и анализы снижения выхода вируса (см. дополнительный рисунок 1 в дополнительных материалах, доступных на сайте http: //dx.doi. org / 10.1155 / 2012/503165, рисунки 3 и 4). Инкубация in vitro с 100 мкл мкг / мл экстракта листьев K. gracilis в течение 30 мин при комнатной температуре не оказала значительного влияния на инфекционность EV71 или CVA16, что указывает на K.экстракт листьев gracilis не проявлял вирулицидной активности против EV71 и CVA16 (данные не показаны). Однако, когда экстракт листьев K. gracilis был добавлен к клеткам RD, инфицированным EV71 и CVA16, наблюдалось значительное ингибирование CPE, индуцированного EV71 и CVA16, как показано на дополнительных рисунках 1 (а) и 1 (b). Для определения выходов вируса в RD-клетках культуральные супернатанты RD-клеток, инфицированных EV71 и CVA16, с одновременной обработкой экстракта листьев K. gracilis и без нее в диапазоне концентраций 1–200 мк г / мл были собирали на 2-й день и анализировали на содержание вирусной РНК с помощью количественной ОТ-ПЦР в реальном времени (рис. 3).Анализ RT-PCR в реальном времени показал, что нагрузки вирусной РНК в супернатанте инфицированных клеток, обработанных 50 мкг мкг / мл экстракта листьев K. gracilis (значение Ct 31,68 для EV71 и значение Ct 28,20 для CVA16) были значительно ниже, чем у инфицированных клеток без обработки экстрактом листьев K. gracilis (значение Ct 13,82 для EV71 и значение Ct 14,25 для CVA16) (рис. 3). Более того, обработка экстрактом листьев K. gracilis в концентрации 50 мкг мкг / мл приводила к снижению нагрузки вирусной РНК более чем на 1 логарифм, поскольку его значение дельта Ct было больше 3.3. Кроме того, экстракт листьев K. gracilis проявлял зависимые от концентрации ингибирующие эффекты на репликацию EV71 и CVA16 с использованием анализа бляшек (рис. 4). Значение IC 50 экстракта листьев K. gracilis в анализе уменьшения зубного налета составляло 35,88 μ г / мл для EV71 и 42,91 μ г / мл для CVA16. Более того, кверцетин, но не феруловая кислота и кемпферол, показал зависимый от концентрации способ уменьшения бляшек (IC 50 = 39,63 мк г / мл для EV71; IC 50 = 59.53 мк г / мл для CVA16) (Рисунок 5). Терапевтический индекс (TI) экстракта листьев K. gracilis был больше 10 против EV71 и CVA16, тогда как TI кверцетина был меньше 10 против CVA16. Экстракт листьев K. gracilis продемонстрировал более высокий противовирусный потенциал, чем его маркерный компонент кверцетин при лечении инфекций EV71 и CVA16.


    3.4. Противовирусный эффект на разных стадиях инфекций EV71 и CVA16

    Изучить возможные механизмы действия K.gracilis против EV71 и CVA16, противовирусную активность экстракта листьев K. gracilis дополнительно определяли с использованием исследований времени добавления (Фиг.6). Клетки RD обрабатывали 50 мкг мкг / мл экстракта листьев K. gracilis за 30 мин до, во время и 30 мин после заражения. Количественная ПЦР вирусной РНК в режиме реального времени показала, что экстракт листьев K. gracilis достиг 90% снижения выхода EV71 через 12 часов после процедуры обработки и через 36 часов после предварительной обработки и процедур одновременной обработки (Рисунок 6 (a )).Кроме того, предварительная и последующая обработка экстракта листьев K. gracilis приводила к 90% снижению выхода CVA16 через 24 часа, а одновременная обработка экстракта листьев K. gracilis приводила к снижению на 90% через 36 часов. (Рисунок 6 (б)). Результаты показали противовирусные эффекты экстракта листьев K. gracilis на репликации EV71 и CVA16, которые, возможно, связаны с нацеливанием на функцию вирусных белков, снижением вирус-индуцированного цитопатогенеза или индукцией противовирусных ответов хозяина.

    3.5. Ингибирование активности вирусной протеазы 2A в клеточном FRET с помощью

    K. gracilis Leaf Extract

    Поскольку протеаза энтеровируса 2A, которая расщепляет вирусные полипротеины и клеточные факторы, обладает многогранной активностью по регулированию различных вирусных и клеточных процессов, включая репликацию вируса и цитопатогенез, в частности апоптоз и врожденный иммунитет [31], возможные механизмы ингибирования экстракта листьев K. gracilis на вирусную протеазу 2A были протестированы с использованием клеточного FRET-анализа активности вирусной протеазы 2A.В общем, использовали стабильную клеточную линию, непрерывно экспрессирующую слитый белок GFP2-DsRed2, связанный сайтом расщепления протеазой 2A (клетки HeLa-G2AwtR; GRTTLSTR GPPRGGPG; указывает сайт расщепления). Слитый белок будет расщепляться вирусной протеазой 2A во время инфицирования. Для проверки эффективности FRET клетки HeLa-G2AwtR инфицировали EV71 или CVA16 при MOI 0,25, 0,5 и 1 в течение 48 часов, собирали и подвергали измерению с помощью флуоресцентного ридера для планшетов. Отношение FRET определяли как интенсивность излучения при 590/14 нм для DsRed2, деленную на интенсивность излучения GFP 2 при 510/10 нм.По сравнению с фиктивным контролем инфекции, инфицированные клетки HeLa-G2AwtR демонстрировали снижение процента интенсивности излучения зондов FRET в зависимости от титра вируса (данные не показаны).

    Для дальнейшей оценки ингибирующего действия экстракта листьев K. gracilis на интенсивность излучения зондов FRET в инфицированных клетках клетки HeLa-G2AwtR инфицировали EV71 или CVA16 при MOI = 1 в течение 48 часов. После 60 мин адсорбции инокулят аспирировали и 200 мкл л среды (модифицированная среда Игла, содержащая 2% FBS) отдельно или среды с К.В каждую лунку добавляли экстракт листьев gracilis в различных концентрациях (Фигура 7). Как показано на фиг. 7, экстракт листьев K. gracilis увеличивал интенсивность излучения зондов FRET в клетках, инфицированных EV71 и CVA16, проявляя ингибирующий эффект на активность энтеровирусной протеазы 2A в зависимости от дозы. Значения IC 50 экстракта листьев K. gracilis в клеточном FRET-анализе составляли 40,82 мк мкг / мл для EV71 и 47,84 мк мкг / мл для CVA16.Результат показал, что экстракт листьев K. gracilis ингибировал протеолитическую активность протеаз EV71 и CVA16 2A.

    3,6. Ингибирование активности

    In vitro 2A протеазы K. gracilis Leaf Extract

    Для подтверждения ингибирующего действия K. gracilis листьев экстракта на вирусную протеазу 2A был проведен анализ in vitro расщепления рекомбинантной 2A протеазы с использованием субстрат на основе пероксидазы хрена. Фрагмент кДНК гена протеазы EV71 2A клонировали в вектор экспрессии pET24a и сливали в рамке считывания с С-концевой гекса-His-меткой.Белок протеазы EV71 2A был экспрессирован в рекомбинантных клетках E. coli после индукции IPTG и очищен с использованием аффинной хроматографии с иммобилизованным металлом (IMAC) (фиг. 8 (a)). Вестерн-блот-анализ очищенного рекомбинантного белка 2A с антителом против His-tag выявил иммунореактивную полосу около 17,3 кДа, которая близко соответствует ожидаемой молекулярной массе (фигура 8 (b)). Каждую из рекомбинантных протеаз 2А различных концентраций (0,75, 1, 2,5, 5 и 10 мкл, мкг / мл) инкубировали с HRP.Затем нерасщепленную HRP в каждой реакции инкубировали с ABTS / H 2 O 2 , а оставшуюся активность HRP измеряли при OD 405 . Как показано, OD , 405, демонстрирует обратную дозозависимую зависимость с увеличением протеазы 2A (фиг. 8 (c)). Значение IC 50 экстракта листьев K. gracilis в анализе протеазы 2A составляло 32,46 мк мкг / мл для EV71. Более того, этот анализ in vitro расщепления рекомбинантной протеазы 2A с использованием ферментативного метода на основе HRP продемонстрировал K.Экстракт листьев gracilis подвергался специфическому ингибированию протеазы 2А.

    3,7. Ингибирование индуцированного вирусом апоптоза и экспрессии провоспалительных генов

    K. gracilis Leaf Extract

    Поскольку протеаза 2A была связана с апоптозом, индуцированным EV71 [32], вестерн-блоттинг-анализ EV71-инфицированных клеток с обработкой K. gracilis проводили с использованием антител против каспазы 9 (дополнительная фигура 3). Экстракт листьев K. gracilis значительно снижает проформу и активную форму каспазы 9 в EV71-инфицированных клетках, что указывает на ингибирующий эффект K.gracilis на протеазу 2А коррелировал со снижением апоптоза, индуцированного EV71. Более того, протеаза 2A препятствует ядерно-цитоплазматическому перемещению NF- κ B посредством расщепления нуклеопоринов FG [31]; В настоящем исследовании дополнительно изучалось, ингибирует ли экстракт листьев K. gracilis индуцированную вирусом экспрессию воспалительного гена и индуцированные сигнальные пути, с помощью количественной ПЦР в реальном времени и Вестерн-блоттинга (фигура 9 и дополнительная фигура 2). И EV71, и CVA16 вызывали значительное повышение уровней мРНК IL-6 и RANTES; с другой стороны, уровни IL-10, NF- κ B p65 и IL-1 α не были повышены в клетках RD через 8 ч после инфицирования (фигура 9 (a)).Обработка экстракта листьев K. gracilis показала зависящее от концентрации ингибирование вызванной EV71 и CVA16 экспрессии IL-6 и RANTES (рисунки 9 (b) и 9 (c)), что указывает на значительный ингибирующий эффект на EV71- и CVA16-. индуцированные воспаления. Впоследствии фосфорилирование p38 MAPK, ERK1 / 2 и NF- κ B p65 в инфицированных вирусом RD клетках с обработкой экстрактом листьев K. gracilis или без нее анализировали вестерн-блоттингом с сайт-специфическими антителами фосфорилирования (Дополнительный Фигура 2).Инфекции EV71 и CVA16 вызывали зависящее от времени увеличение фосфорилирования p65 p38 MAPK, ERK1 / 2 и NF- κ B. Обработка экстрактом листьев K. gracilis в инфицированных клетках ингибировала фосфорилирование NF- κ B p65 через 4 часа после заражения. Результаты продемонстрировали, что ингибирование индуцированной EV71 и CVA16 экспрессии IL-6 и RANTES коррелировало со снижением активации p65 NF- κ B в клетках RD, и предполагали антиапоптотический и противовоспалительный эффект K.Экстракт листьев gracilis участвует в его противовирусной активности против EV71 и CVA16.

    3.8.

    In vivo Противовирусная активность K. gracilis Экстракт листьев

    Для оценки in vivo противовирусной активности экстракта листьев K. gracilis вирусные нагрузки были исследованы в образцах кишечника от инокулированных EV71 подсосных мышей с обработкой или без нее. экстракта листьев K. gracilis (дополнительная таблица 1). В модели сосущих мышей EV71 обнаруживался в образцах кишечника на 2, 4 и 6 дни после внутрибрюшинной инокуляции.Эффект обработки экстрактом листьев K. gracilis у подсосных мышей, инокулированных EV71 EV71, продемонстрировал неопределяемую вирусную нагрузку в образцах кишечника на 2-й день после одной внутрибрюшинной инъекции 2 мг / кг экстракта листьев K. gracilis и на 6-й день. путем трех внутрибрюшинных инъекций 1 мг / кг экстракта листьев K. gracilis . Результаты выявили противовирусную активность in vivo экстракта листьев K. gracilis , а также зависимый от концентрации способ ингибирования репликации EV71 в кишечнике мышей-сосунков.

    4. Обсуждение

    K. gracilis — традиционное китайское лекарственное растение, обычно используемое для лечения травм, боли и воспалений; такие эффекты были также подтверждены в недавних экспериментах на животных по индуцированной формалином ноцицепции и воспалению, индуцированному λ -каррагинан [2]. Это исследование продемонстрировало экстракт листьев K. gracilis , проявляющий противовирусную активность против EV71 и CVA16 in vitro и in vivo (рисунки 3-8, дополнительная таблица 1).Результаты показали, что K. gracilis проявляет противовирусное действие, аналогичное другим видам рода Kalanchoe. Например, K. pinnata Pers. была показана значительная противовирусная активность против вирусов простого герпеса и Эпштейна-Барра [16]. K. farinacea подавляет репликацию in vitro вируса гриппа A и вируса простого герпеса типа 1 [15]. K. brasiliensis обладает противовоспалительным и иммунодепрессивным действием на вызванное зимозаном воспаление у мышей [33].Экстракты Kalanchoe farinacea обладают in vitro противовирусной активностью против гриппа A и простого герпеса типа 1 [15]. Вместе с результатами и предыдущими сообщениями, виды трав рода Kalanchoe могут обладать активными противовирусными соединениями.

    ВЭЖХ и УФ / видимые спектры поглощения продемонстрировали химический состав и профиль отпечатка пальца K. gracilis листового экстракта этилацетатного слоя с помощью матричного фотодиодного детектора (рис. 1). Относительные количества феруловой кислоты (~ 7.59% по массе), кверцетин (~ 0,33% по массе) и кемпферол (~ 0,16% по массе) также были идентифицированы в экстракте листьев этилацетатного слоя K. gracilis , и было обнаружено, что они согласуются с идентифицировали флавоноиды K. gracilis в предыдущих сообщениях [3–5]. Флавоноиды обладают множеством функций, среди которых ингибирование репликации вирусов [11–14]. В настоящем исследовании было продемонстрировано, что кверцетин обладает зависимой от концентрации антиэнтеровирусной активностью со значениями IC 50 , равными 39.63 μ мкг / мл для EV71 и 59,53 μ мкг / мл для CVA16 (рисунок 5). Однако антиэнтеровирусная активность кверцетина была менее эффективной, чем у экстракта листьев K. gracilis (рис. 4). Экстракт листьев K. gracilis , как предполагается, содержит другие мощные антиэнтеровирусные компоненты, помимо кверцетина. С фитохимической точки зрения известно, что видов каланхоэ содержат флавоноиды (например, теолин, кверцетин, кверцитрин, кемпферол, эупафолин), гликозидные производные эупафолина, буфадиенолиды и кумарины [4, 5, 16], в том числе бис- и тетра-кумарины. было показано ингибирующее действие на активность интегразы ВИЧ-1 [7], тогда как буфадиенолиды могут снижать активацию раннего антигена вируса Эпштейна-Барра [16].Кроме того, многие активные соединения натуральных продуктов были идентифицированы как потенциальные агенты против EV71, включая галловую кислоту (IC 50 = 0,8 г / мл) [34], аллофикоцианин (IC 50 = 0,056 мк M). [35], хризоспленетин (IC 50 = 0,2 M), пендулетин (IC 50 = 0,2 M) [36] и алоэ-эмодин (IC 50 = 0,14 M) [37]. Это исследование показало, что кверцетин проявляет специфическую активность против EV71 (IC 50 = 39,6 г / мл), но может быть менее действенным, чем активные соединения натуральных продуктов, указанные в предыдущих отчетах выше.Следовательно, активное фитохимическое содержание экстракта листьев K. gracilis против EV71 и CVA16 должно быть дополнительно охарактеризовано.

    При оценке цитотоксичности экстракта листьев K. gracilis было показано, что он проявляет меньшую цитотоксичность по сравнению с феруловой кислотой, кверцетином и кемпферолом. Мало того, он показал лучшую противовирусную активность против EV71 и CVA16 по сравнению с тремя компонентами маркера (Рисунки 2–4, Дополнительный Рисунок 1). Экстракт листьев K. gracilis в концентрации 50 мкг мкг / мл эффективно подавлял 90% -ное производство обоих вирусов в клетках RD (рис. 3).Кроме того, значение IC 50 экстракта листьев K. gracilis против EV71 и CVA16 составило 35,88 мк мкг / мл и 42,91 мк мкг / мл, соответственно (Рисунок 4), в то время как терапевтический индекс К. gracilis против EV71 и CVA16 варьировала от 23 до 28. Обзор литературы показал, что некоторые экстракты китайских трав проявляют активность против EV71 in vitro , например Houttuynia cordata Thunb (IC 50 = 125.9 μ г / мл) [38], Woodfordia fruticosa Kurz (IC 50 = 1.2 мк г / мл) [34], Salvia miltiorrhiza (IC 50 = 585 мк г / мл) [39], Pueraria lobata (IC 50 = 0,028 мк г / мл) [40] и Glycyrrhiza uralensis (IC 50 = 0,056 мк г / мл) [41]. Следовательно, экстракт листьев K. gracilis проявлял умеренно сильную активность против EV71 и CVA16.

    Хотя предварительная и последующая обработка экстракта листьев K. gracilis показала разницу во времени, две обработки достигли 90% снижения вирусной активности (Рисунок 6), что означает, что противовирусная активность K.gracilis может быть связан с нацеливанием на вирусные протеолитические ферменты, механизм репликации вирусной РНК и факторы клетки-хозяина, и даже с уменьшением индуцированного вирусом цитопатогенеза или индукцией противовирусных ответов хозяина. Поскольку протеаза энтеровируса 2A расщепляет вирусные полипротеины и клеточные факторы, которые регулируют апоптоз и ядерно-цитоплазматический транспорт NF- κ B [31, 32], вирусная протеаза 2A была выбрана в качестве возможной мишени для экстракта листьев K. gracilis . In vitro рекомбинантная протеаза 2A и клеточный FRET-анализ показали, что экстракт листьев K. gracilis ингибировал ферментативную активность вирусных протеаз 2A в зависимости от концентрации (Фигуры 7 и 8). Кроме того, экстракт листьев K. gracilis значительно снижал апоптоз, индуцированный EV71, такой как уменьшение проформы и активной формы каспазы 9 в инфицированных EV71 клетках (дополнительная фигура 3). Точно так же экстракт листьев K. gracilis снижал повышающую регуляцию экспрессии генов IL-6 и RANTES из-за инфекции EV71 и / или CVA16 (фиг.9), которая коррелировала с понижающей регуляцией индуцированного вирусом NF- κ B -опосредованная передача сигналов (дополнительный рисунок 2).Таким образом, экстракт листьев K. gracilis проявлял ингибирующее действие на энтеровирусную протеазу 2A. Это действие может быть согласовано с уменьшением вирус-индуцированного апоптоза и провоспалительного процесса, опосредованного NF- κ B. Наша будущая перспектива будет заключаться в очистке и идентификации сильнодействующих соединений K. gracili как вирусных ингибиторов 2A.

    Было показано, что значительное повышение уровней IL-1 β , IL-6, IL-10, IL-13, IFN- γ и TNF- α обнаруживается в сыворотке и спинномозговая жидкость у пациентов, инфицированных EV71 [23, 42–45].Более того, повышение уровня IL-1 β , IL-6 и TNF- α в спинномозговой жидкости сильно коррелирует с клинической тяжестью и считается ответственным за иммунопатогенез, индуцированный EV71 [26, 44, 46]. Клинически лечение нейтрализующими антителами против IL-6 увеличивает выживаемость, снижает повреждение тканей и активирует иммунные клетки, но не может повлиять на вирусную нагрузку у новорожденных мышей, инфицированных EV71 [47]. Мы продемонстрировали, что концентрация экстракта листьев K. gracilis зависимо снижала уровни мРНК IL-6, усиленные инфекцией EV71 или CVA16 в клетках RD (Фигуры 9 (a) –9 (c)).Кроме того, мы предположили значительные ингибирующие эффекты экстракта листьев K. gracilis на in vitro репликаций EV71 и CVA16 (дополнительный рисунок 1, рисунки 4-6), связанные с его мощным ингибированием активности вирусной протеазы 2A (рисунки 7 и 8). ). Таким образом, комбинация эффективных соединений экстракта листьев K. gracilis демонстрирует потенциальный терапевтический подход против энтеровирусной инфекции.

    В заключение, экстракт листьев K. gracilis содержит эффективные соединения с антиэнтеровирусной активностью. Экстракт листьев K. gracilis обладает сильным действием по ингибированию ферментативной активности вирусной протеазы 2A и снижению индуцированной вирусом экспрессии провоспалительных цитокинов IL-6 и RANTES. Экстракт листьев K. gracilis может быть безопасным и потенциальным терапевтическим средством против энтеровирусной инфекции.

    Конфликт интересов

    Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

    Благодарности

    Этот проект финансировался грантами Китайского медицинского университета (CMU99-NSC-08, CMU99-S-23, CMU98-P-03-M, CMU100-S-33) и Национального научного совета Китайской Республики. (NSC97–2320-B-039-023-MY3, NSC99–2628-B-039-006-MY3).

    Дополнительные материалы

    Дополнительный рисунок 1: Снижение цитопатических эффектов экстрактом листьев K. gracilis . Морфологию клеток RD, инфицированных EV71 (A) или CVA16 (B), наблюдали в отношении эффекта экстракта листьев K. gracilis в анализе восстановления CPE. EV71 и CVA16 при MOI 1 каждый был смешан с экстрактом листьев K. gracilis , а затем добавлен в культуры клеток RD. Инкубированные клетки RD наблюдали и фотографировали под микроскопом через 24 и 48 часов после заражения.

    Дополнительная фигура 2: Фосфорилирование p38 MAPK, ERK1 / 2 и NF- κ B p65 в инфицированных клетках RD с обработкой экстрактом листьев K. gracilis или без нее. Клетки RD инфицировали EV71 (A) или CVA16 (B) и одновременно обрабатывали экстрактом листьев K. racilis в концентрации 50 мкг / мкг / мл. Клетки собирали через 0, 30, 60 и 240 мин после заражения и проводили вестерн-блоттинг, как описано в разделе «Материалы и методы».

    Дополнительная фигура 3: Вестерн-блоттинг каспазы 9 в инфицированных EV71 клетках RD с обработкой экстрактом листьев K. gracilis или без нее. Клетки RD инфицировали EV71 при MOI 1 в отсутствие (дорожка 1) и в присутствии экстракта листьев K.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *