Кератиновое масло для желудка: Кому противопоказано употреблять масло на голодный желудок

Содержание

Кому противопоказано употреблять масло на голодный желудок

Украинский диетолог Татьяна Фиалкова убеждена, что такие советы подходят не всем, говорится в сообщении в Instagram.

Читайте также: Почему нельзя употреблять горячую пищу: предостережения диетолога

Если человек будет употреблять масло натощак, то этот продукт стимулирует мощный выброс желчи. Из-за этого могут обостриться такие болезни как панкреатит и гастрит.

Не подходит употребление конопляного, льняного и других видов масел при:

– хроническом панкреатите в состоянии обострения;

– выраженных застойных явлениях;

– паразитарной инфекции;

– желчнокаменной болезни.

При каких болезнях нельзя пить масло натощак

В худшем случае употребление масла натощак может привести к госпитализации и хирургическому вмешательству. Также у человека могут возникнуть тошнота, рвота, воспаление слизистых желудочно-кишечного тракта.

Пить масло натощак можно только тем, у кого нет воспалительных болезней желудка и кто предварительно очистил желчевыводящую систему специальным курсом. В этом случае будет выделяться небольшое количество желчи, что будет попадать лишь в 12-перстную кишку, а не в желудок.

Прежде чем принимать масло натощак, нужно пройти УЗИ. Диетолог советует добавлять растительное масло в теплые завтраки.

До начала употребления масла натощак пройдите УЗИ

Если же у человека нет проблем с желудком, а желчевыводящая система была предварительно подготовлена, то употребление масла натощак будет полезным и сможет оздоровить организм. После употребления масла не нужно пить воду и завтракать минимум 15 минут, чтобы избежать тошноты.

К слову, результаты исследований подтверждают, что оливковое масло защищает клетки от изменений, которые могут привести к раку.

Больше новостей, касающихся лечения различных заболеваний, медицины в Украине, здорового образа жизни и питания, беременности и родов, открытий в сфере медицины и многое другое – читайте в разделе Здоровье.

Кунжутное масло при гастрите и панкреатите: как принимать

«Король всех масел» — именно таким сильным эпитетом сопровождают масло кунжута. А все потому, что его польза как для здоровья в целом, так и для заболеваний желудка – неоценима.

Не только для желудка – сопутствующее позитивное действие проявляется и на здоровье кишечника. Так, например, при внутреннем приеме вам удастся значительно снизить проявления язвенного колита, болезни Крона, нарушения моторики и СРК (синдрома раздражённого кишечника).

Химический состав кунжутного масла

Основные компоненты продукта – кислоты: стеариновая, арахидоновая, пальмитиновая, олеиновая и другие. Все они относятся к классу поли- и мононасыщенных жирных кислот (ПНЖК и МНЖК). Также в составе есть ценный витамин К, контролирующий работу органов ЖКТ, и витамин Е, известный своими антиоксидантными свойствами.

Но уникальные и практически не содержащиеся в нашей пище элементы – сезамин, сезамол и сесамолин – и есть теми антиоксидантами, которые предотвращают онкологию и снимают воспаление.

Купить кунжутное масло 200 мл

Кунжутное масло для желудка: 3 ценных свойства, которыми объясняется польза при гастрите

Ⅰ Высокое содержание антиоксидантов

Кунжутное масло содержит сезамол и сезаминол, два антиоксиданта. Это вещества, которые помогают уменьшить процесс повреждение клеток, вызванный свободными радикалами. Следовательно, кунжутное масло при гастрите с повышенной кислотностью и пониженным ее содержанием окажет позитивный эффект и предупредит развитие болезни.

Ⅱ Сильнейшие противовоспалительные возможности

За счет своего уникального состава кунжутное масло при гастрите снижает воспалительные маркеры, в том числе выработку оксида азота, свойственную эрозийному типу заболеваний. Таким образом регулярный прием масла кунжута положительно скажется на целостности слизистой – оно способствует заживлению любых повреждений и язв.

Ⅲ Сбалансированный состав жиров

Прием этого продукта позволит обеспечить суточную потребность организма жирами, которые участвуют и в синтезе белка, и в клеткотворении, особенно – слизистых. В составе кунжутного масла для желудка содержится 82% ненасыщенных жирных кислот (Омега-6).

Обратите внимание: самолечение не рекомендуется лицам, склонным к любым проявлениям аллергических реакций. Компоненты масла семени кунжута могут вызывать индивидуальную непереносимость, обязательно проконсультируйтесь со своим лечащим врачом перед применением.

Купить кунжутное масло 500 мл

Кунжутное масло при панкреатите

Противовоспалительные характеристики и способность позитивно влиять на уровень глюкозы в крови – повышая пониженный и снижая высокий – говорят о пользе использования продукта при воспалении поджелудочной железы. Масло кунжута действует многонаправленно, купируя воспалительный процесс и нормализуя работу органа, от которого зависит и переваривание пищи, и усвояемость полезных веществ.

Способ применения кунжутного масла

Прием кунжутного масла при хроническом панкреатите и гастрите должен осуществляться не менее чем за полчаса до приема пищи. Масло оказывает обволакивающее и противовоспалительное действие. Также не следует превышать рекомендуемую дозировку. Указанную ниже суточную норму нужно распределить на два-три приема:

Детям старше 14-ти лет и взрослым – 15 мл (3 чайных ложки)
Детям с 7 до 12 лет – 5 мл (1 чайная ложка)
Детям до 6 лет – 5 капель (пипетка или 0,5 чайной ложки).

Мы стараемся ответить на все возникающие у вас вопросы. В том числе и рассказываем, можно ли кунжутное масло при панкреатите, какие еще ценные свойства есть у этого продукта и как его применять. Вдохновляйтесь и верьте в силу природы для здоровья вместе с нами!

Купить кунжутное масло 1 л

ЛЕЧЕНИЕ РАССТРОЙСТВА ЖЕЛУДКА ПОСЛЕ ГЛАЗУРИ СО СЛИВОЧНЫМ КРЕМОМ — ХОРОШЕЕ ЗДОРОВЬЕ

Содержание:

Глазурь из сливочного крема должна приносить удовольствие, но у некоторых людей глазурь из сливочного крема может вызвать расстройство желудка. Расстройство желудка — это общий термин, используемый для обозначения вздутия живота, тошноты, рвоты, диареи и спазмов в животе. Если у вас развилось расстройство желудка через несколько часов после употребления сливочного крема в единичном случае, у вас может быть пищевое отравление. Если вы замечаете, что у вас появляется боль в животе каждый раз, когда вы едите глазурь с масляным кремом, возможно, у вас непереносимость лактозы или аллергия на молоко. Запишитесь на прием к врачу, чтобы определить причину расстройства желудка.

Пищевое отравление

Пищевое отравление может произойти после употребления в пищу глазури из сливочного крема, если сливочный крем был кислым или если глазурь была перекрестно загрязнена посудой или другими ингредиентами, использованными для ее приготовления. Если у вас пищевое отравление, симптомы проявятся через 4–24 часа после употребления зараженной глазури. По данным MayoClinic.com, глазурь из сливочного крема, вызывающая пищевое отравление, заражена инфекционными организмами, такими как бактерии, паразиты или токсины. Единственный способ лечения пищевого отравления — это изменить свой рацион и много отдыхать.

Непереносимость лактозы

По данным Национального центра обмена информацией по заболеваниям пищеварительной системы, масляные сливки содержат меньше лактозы, чем обычное молоко, но все же могут вызывать симптомы непереносимости лактозы, если у вас ее серьезная непереносимость. Лактоза — это сахар, содержащийся в молочных продуктах. После того, как вы съели глазурь из масляного крема, ваш организм не сможет правильно усвоить лактозу. Эта неспособность приводит к раздражению кишечника, газам, стулу с неприятным запахом, тошноте, вздутию живота, спазмам, боли в желудке и диарее. Вы можете предотвратить эти симптомы, приняв ферментные добавки, которые помогут вашему организму переваривать лактозу в глазури масляного крема.

Аллергия на молоко

Если у вас аллергия на молоко, употребление сливочного крема может вызвать аллергическую реакцию. Согласно данным Kids Health, аллергия на молоко является результатом гиперчувствительности к белкам молока: казеину и сыворотке. Эти белки содержатся в сливочном креме и заставят иммунную систему атаковать белки при приеме внутрь. Атака иммунной системы вызывает воспаление в кишечнике, легких и носовых пазухах.

Связанные статьи LeafTv

Как взбить сливочное масло в блендере

Как определить прогорклое масло

Как хранить и замораживать карамель

Как хранить глазурь для сливочного сыра

Что я могу добавить в сливки из пшеницы?

Предупреждение об аллергии на молоко

Симптомы аллергии на молоко могут развиться в течение нескольких минут после употребления глазури или в течение часа. Аллергия на молоко — серьезное заболевание, которое требует осмотра врачом. Сильная аллергическая реакция может вызвать систематическую реакцию всего организма, называемую анафилаксией, которая может привести к смерти, если не лечить должным образом.

Looduse Abi — 🌿Льняное масло — один из самых…

🌿Kissell on palju kasulikum kui pakkimahl!☝️

👌Esiteks, tänu oma paksu konsistentsile kissell katab mao limakesta, ei kahjusta seedetrakti organid ja mõjutab hästi kogu nende tööle.
👌Teiseks, kissellis on palju kaloreid ja on soovitatav lastele kehakaalu tõstmiseks.

🔥UUDISTOODE

🍹🔥Laste kissell Vitoška «Palitra vkusov» tootjalt:

🍹Vaarikamaitseline kissell vitamiinidega
🍹Mustikamaitseline kissell vitamiinidega
🍹Jõhvikamaitseline kissell vitamiindega ja kaltsiumiga
🍹Aprikoosimaitseline kissell vitamiinidega ja prebiootikumiga
🍹Maasikamaitseline kissell vitamiinidega ja prebiootikumiga

😋Soovitatav väikestele ja kooli- lastele vitamiinide lisaallikana.

🥰Valmistamine: paki sisule (25 gr) lisada keeva vett (180 ml), segada, lasta jahtuda.

Hind: 2.80 EUR (25 gr x 8 tk)

***************

🌿Кисель гораздо полезнее соков из пакетов!☝️

👌Во-первых, благодаря густой консистенции кисель обволакивает слизистую желудка, усваивается, не повреждая стенки органов пищеварения. Кроме того — благотворно действует на всю работу ЖКТ.
👌Во-вторых, кисель довольно калориен, поэтому может быть рекомендован деткам для набора веса.

🔥НОВИНКА

🍹🔥Детский кисель Витошка от производителя «Палитра вкусов» с витаминами, кальцием и пребиотиками:

🍹Кисель с витаминами МАЛИНА
🍹Кисель с витаминами ЧЕРНИКА
🍹Кисель с витаминами и кальцием КЛЮКВА
🍹Кисель с витаминами и пребиотиком АБРИКОС 🍹Кисель с витаминами и пребиотиком КЛУБНИКА

😋Предназначен в качестве дополнительного источника витаминов для детей дошкольного и школьного возраста.

🥰Способ приготовления: содержимое пакета (25 г) залить кипящей водой (180 мл), размешать, остудить.

Цена: 2.80 EUR (25 гр x 8 шт)

#palitravkusov #vitoshka #kissell #lastekissell #lastekissellvitamiinidega #палитравкусов #витошка #кисель #детскийкисель #детскийкисельсвитаминами

Изготовление язвенно-адгезивного кератинового гидрогеля для полости рта для заживления язвы желудка у крысы | Регенеративные биоматериалы

Аннотация

Гидрогель использовался для лечения язвенной болезни желудка путем остановки кровотечения, отделения язвы от желудочных жидкостей и обеспечения основы внеклеточного матрикса для регенерации тканей, однако в большинстве случаев это лечение проводится с помощью эндоскопического катетера. Здесь мы разработали пероральный кератиновый гидрогель для ускорения заживления язвы без эндоскопического контроля, который может специально прилипать к язве из-за образования высоковязкого геля на поверхности раны in vivo .Примерно 50% адгезивного кератинового гидрогеля, связанного с язвой, может находиться в обработанном этанолом желудке крысы в течение 12 часов, в то время как примерно 18% из них сохраняются в желудке здоровой крысы за то же время. Кроме того, кератиновые гидрогели ускоряли заживление язвы желудка, вызванной этанолом, останавливая кровотечение, предотвращая повреждение клеток эпителия кислотой желудка, подавляя воспаление и способствуя повторной эпителизации. Пероральное введение кератинового гидрогеля при лечении язвы желудка может улучшить комплаентность пациента и уменьшить осложнения при гастроскопии.Результаты наших исследований показывают перспективный подход на основе биоматериалов для лечения язв желудочно-кишечного тракта.

Введение

Люди во всем мире страдают язвой желудка с высокой заболеваемостью и значительной смертностью. Образование язвы желудка вызвано нарушением баланса между защитными факторами, такими как слизь, поверхностные эпителиальные клетки, слизистый барьер, клеточная регенерация и агрессивные факторы, включая активные формы кислорода, желудочную кислоту и пепсин [1].Нарушение баланса в основном вызвано инфекцией Helicobacter pylori , стрессом, курением, длительным приемом нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП), неправильным питанием и особенно алкоголем, что приводит к разрыву слизистой оболочки, достигающему подслизистой оболочки [2– 4]. Открытие эффективных кислотных супрессивных средств значительно снизило частоту, частоту госпитализаций и смертность от язвы желудка [5, 6]. Однако лечение язвенной болезни и относительных осложнений остается клинической проблемой из-за приема НПВП и низких доз аспирина [6, 7].

Одним из эффективных подходов к заживлению язвы желудка является терапия гидрогелем [8–12]. Гидрогелевое покрытие на язве может остановить кровотечение и защитить язву от желудочного сока, а гидрогель внеклеточного матрикса (ЕСМ) имеет прямое влияние на регенерацию ткани, заживающей рану. Кроме того, некоторые терапевтические агенты могут замедленно высвобождаться из гидрогеля для усиления терапевтического эффекта [13-15]. Однако традиционные гидрогели не могут применяться непосредственно перорально для лечения язвы желудка, поскольку только небольшое количество гидрогеля может контактировать с язвой из-за перистальтики желудочно-кишечного тракта [16, 17], в то время как большая часть гидрогеля выводится из желудка.Таким образом, большинство гидрогелей использовалось при гастроскопии при лечении язвы желудка [8–12]. Но гастроскопия снижает комплаентность пациента, что также сопряжено с риском ряда осложнений, таких как внутреннее кровотечение, разрыв слизистой оболочки пищевода, желудка или двенадцатиперстной кишки [18–20].

Кератины широко используются для заживления ран и гемостаза из-за их уникальных характеристик биоактивности, биосовместимости, биоразлагаемости и естественного обилия [21–24]. В наших предыдущих исследованиях кератины очень перспективны для заживления ран, так как примерно 90% закрытия ран было достигнуто в течение 10 дней после лечения кератиновым гидрогелем [24].При использовании для гемостаза in vivo мы обнаружили, что кератины вызывают образование высоковязкого геля на ране [25]. Здесь мы предположили, что кератиновый гель может прилипать к язве после перорального введения из-за его свойств высокой вязкости и длительное время оставаться в желудке, что улучшит заживление язвы желудка. Здесь кератины были извлечены из человеческих волос и использованы для приготовления гидрогелей. Охарактеризованы кератиновые гидрогели с разной концентрацией. Затем была создана модель индуцированной этанолом язвы желудка у крыс для оценки адгезионных свойств язвы и заживляющего эффекта кератиновых гидрогелей.Насколько нам известно, это первый раз, когда кератины были использованы для терапии язвенной болезни in vivo со специфическими адгезионными свойствами раны.

Материалы и методы

Материалы

Человеческие волосы были собраны в местных парикмахерских в Чунцине, Китай. Тиогликолевая кислота (TGA), додецилсульфат натрия (SDS), пероксид водорода (H ₂ O ₂), соляная кислота и гидроксид натрия были приобретены у Kelong Chemical Reagent Co., Ltd, Китай. Набор малонового диальдегида (MDA), набор красителей Gycogen (PAS) и набор супероксиддисмутазы (SOD) были приобретены в Nanjing Jiancheng Bioengineering Research Institute Co., Ltd. China. Набор для иммуноферментного анализа (ELISA) был приобретен у Neobioscience Technology Company (Пекин, Китай). Все реактивы, использованные в этом исследовании, имеют аналитическую чистоту.

Экстракция кератина человеческого волоса

Извлечение кератина человеческого волоса проводилось в соответствии с нашим предыдущим отчетом [26].Человеческие волосы, собранные в местных парикмахерских, после мытья подвергали токопроводящей обработке с использованием ТГА (0,5 М) при pH 11,0, что использовалось для разрыва цистиновых связей. Восстановительный раствор сохраняли, а неочищенную фракцию экстрагировали по очереди трис-основанием (100 мМ) и деионизированной (ДИ) водой. Затем экстракты объединяли и центрифугировали при 6000 об / мин в течение 40 минут, а затем подвергали диализу (MWCO 5000 Да) с помощью ультрафильтрационной плоской листовой мембраны (FM1501, Filter & Membrane Technology, Пекин, Китай).Наконец, pH экстракции доводили до 7,4 и образец подвергали диализу перед лиофилизацией.

Приготовление кератиновых гидрогелей

Кератиновые гидрогели человеческих волос (KHG) были приготовлены с концентрациями 10% (KHG1), 15% (KHG2) и 20% (KHG3) (мас. / Об.%). Вкратце, лиофилизированные кератины, преобразованные в порошки, встряхивали в растворе перекиси водорода (5 мас.%) Для образования гомогенной дисперсии и интенсивно перемешивали магнитной мешалкой в закрытом стеклянном контейнере при комнатной температуре.Гидрогели образовывались после 3 ч перемешивания. Избыточные образцы замораживали при 40 ^○ ° C и лиофилизировали с помощью вакуумной сублимационной сушилки.

Морфологическое наблюдение

Морфология KHG наблюдалась с помощью сканирующего электронного микроскопа (Nano SEM 400, FEI, Hillsboro, OR, USA) при ускоряющем напряжении 20 кВ. KHG лиофилизировали, каркас поперечного сечения помещали на адгезивную проводящую смолу и дважды покрывали распылением золотом в течение 15 с с использованием системы покрытия Polar on SEM.

Исследования водопоглощения

Кусок высушенных KHG разрезали на кусочки по 200 мг и случайным образом разделили на три подгруппы. Каждую группу добавляли в коническую колбу, наполненную 50 мл искусственного желудочного сока (AGJ). Конические колбы встряхивали при температуре 37 ° C со скоростью 130 об / мин. Каркасы были удалены из AGJ, и водопоглощение KHG было определено следующим образом:

Водопоглощение = Ws-WoWo × 100%

, где W s и W o — веса полностью насыщенных и сухих KHG, соответственно. .

Реологические свойства

Реологические свойства KHG были охарактеризованы с помощью ретикатора вращения (Gemini HR Nano 200, Малверн, Великобритания) с конфигурацией пластина-пластина диаметром 20 мм. Испытания на качание частоты колебаний проводились в диапазоне от 0,01 Гц до 10 Гц при постоянной деформации 5% при 25 ° C. Зазор между двумя пластинами был установлен равным 0,1 мм. Все гидрогели вводили на планшет через лечебный ковш. Перед испытанием гидрогели дегазировали с помощью вакуумного насоса.Модуль упругости ( G ’) и модуль вязкости ( G ”) гидрогелей были измерены три раза.

Создание животноводческих моделей язвы желудка

Все эксперименты на животных были выполнены в соответствии с рекомендациями Комитета по этике и экспериментам на животных Третьего военного медицинского университета, Китай. Использовали крыс Sprague – Dawley (SD) массой от 250 г до 300 г. Им давали воду и стандартный корм, кормили фуражом и содержали в чистоте при температуре 22 ± 2 ° C.Крыс SD не кормили и давали только воду в течение 24 часов перед реализацией модели язвы желудка. Крысам вводили абсолютный этанол (4 мл / кг) через желудочный зонд и проводили эвтаназию для наблюдения за язвой желудка, образовавшейся после введения некоторого количества этанола в течение 2 часов [27, 28]. Гистологические изменения желудка, такие как застой, отек, кровотечение и некроз, визуализировались с помощью окрашивания гематоксилином и эозином (H&E).

Оценка адгезионных свойств язвы

Макроскопическое наблюдение

Для оценки адгезионных свойств язвы KHG крысам, получавшим этанол, и здоровым крысам давали KHG2 (1.6 мг / кг) через желудочный зонд. Затем их желудки были удалены под наркозом диэтиловым эфиром, рассечены вдоль большого залива, затем промыты 20 мл AGJ, чтобы вымыть содержимое желудка, и отображены с помощью цифровой камеры. Кроме того, гидрогели со стенок желудка соскабливали с помощью предметного стекла и визуализировали. Степень охвата KHG язвы желудка рассчитывалась как соотношение площадей между KHG и язвой.

Гамма-сцинтиграфия

Гамма-сцинтиграфия была проведена для количественной оценки количества KHG в желудке в разное время.Йод-131 (¹³¹ I) был использован для мечения KHG путем физического поглощения [29]. Вкратце, кератины растворяли в 5% растворе H ₂ O ₂ при различных концентрациях (100, 150 и 200 мг / мл), и также добавляли раствор ¹³¹ I, эквивалентный конечной радиоактивности 0,4 мКи / мл. в кератиновый раствор. KHG, меченные ¹³¹ I, образовывались после перемешивания при 1200 об / мин (37 ° C) в течение ночи. Все процедуры проводились в вытяжном шкафу специалистом ядерной медицины.Была исследована стабильность гидрогелей, меченных ¹³¹ I.

Крысы, индуцированные этанолом, весом около 250–300 г были случайным образом разделены на три группы, получавшие ¹³¹ I-меченные KHG в различных концентрациях, а именно 100 мг / мл (¹³¹ I-KHG1), 150 мг / мл. мл (¹³¹ I — KHG2) и 200 мг / мл (¹³¹ I — KHG3) соответственно. Кроме того, здоровым крысам также давали ¹³¹ I-KHG2 в качестве контрольной группы. KHG, скорректированные до радиоактивности 40 мк, вводили через иглу для лаважа после того, как крысы голодали в течение 24 часов.Сцинтиграммы препарата для испытаний отслеживали с помощью оборудования для однофотонной эмиссионной компьютерной томографии (ОФЭКТ) с двойными детекторными блоками с переменным углом (Symbian T2, Siemens, Philadelphia, PA, USA). Область интереса (ROI, круг диаметром 100 мм) была идентифицирована для определения радиоактивности в желудке в различные моменты времени (0 ч, 2 ч, 4 ч, 6 ч, 8 ч и 12 ч). Количественная оценка рентабельности инвестиций была проведена с использованием рабочего места для сбора данных (Siemens Medical Solutions). Радиоактивность в ROI в 0 ч была взята за контроль и обозначена как 100% [29].

Лечение язв, вызванных этанолом

крыс, обработанных этанолом, случайным образом разделили на группы, обработанные KHG2 (0,8, 1,6 и 3,2 мл / кг) и группу носителя (1,6 мл / кг физиологического раствора). Нормальных крыс также кормили 1,6 мл / кг физиологического раствора в качестве фиктивной группы. Всем крысам перорально вводили KHG или физиологический раствор один раз в день, а крыс из разных групп подвергали эвтаназии через 1, 3 и 5 дней. Каждую крысу забивали в гомологичный момент. Желудки были удалены и вскрыты по большому изгибу желудка с помощью физиологического раствора.Все желудки хранили при -80 ° C.

Слизь стенок желудка каждого желудка тщательно соскребалась щеткой для волос. Язвенные поражения регистрировались и оценивались: 0 = отсутствие поражений (нормальный желудок), 0,5 = гиперемия, 1 = геморрагическое пятно, 2 = 1–5 небольших язв, 3 = множество мелких язв, 4 = 1–5 мелких и 1–3 большие язвы, 5 = множество мелких и крупных язв; 6 = желудок полон язв с некоторыми перфорациями [30, 31]. Каждый желудок крыс был визуализирован с помощью цифровой камеры, когда крыс умерщвляли без жалоб, а стенку желудка тщательно промывали.

Определение язвенного индекса и процента торможения

Площадь язвенного повреждения (² мм) была статистически определена с использованием изображения J. Индекс язвы (UI) для всех крыс был показан по язвенному повреждению (² мм), а процент ингибирования (PI%) был рассчитан в соответствии с к следующему уравнению [32]:

PI% = GUC — GUTGUC × 100%

, где GU _c — площадь язвы желудка у крысы с моделью язвы, а GU _t — площадь язвы желудка крысы, получавшей KHGs. .

Гистопатологическая оценка

Желудки крыс фиксировали в 4% (об. / Об.) Растворе формалина и хранили в холодильнике, затем обезвоживали с возрастающей концентрацией спирта и заливали белым парафином, когда весь спирт улетучился. Ткань желудка разрезали на кусок толщиной около 5 мкм с использованием парафиновой нарезки (CUT 4050, MicroTEC, München, Германия). Некоторые из этих кусочков были окрашены раствором гематоксилин-эозина (H & E), другие — периодической кислотой Шиффа (PAS) для анализа гликопротеинов слизистой оболочки, которые использовались для оценки уровня повреждения слизистой оболочки желудка и изменений протонирования гликопротеины.

Биохимический анализ

Ткани, хранящиеся при -8 ° C, разрезали на кусочки и взвешивали до 300 мг для приготовления ткани желудка и гомогенизировали с использованием гомогенизатора (YHF-DY, Ningbo Scentz Biotechnology, Нинбо, Китай) в ледяной ванне 1 × PBS. буфер с 1% RIPA для лизиса клеток. Гомогенизированные растворы центрифугировали при 12 000 об / мин в течение 15 мин при 4 ° C. Супернатант хранили и хранили при -80 ° C для анализа общего белка и биохимических факторов. Концентрацию общего белка измеряли с помощью набора для анализа белка BCA (Beyotime Biotechnology, Токио, Китай) в соответствии с инструкциями производителя.Активность SOD, IL-6 и MDA также определяли с использованием коммерческих наборов для анализа (Jiancheng Bioengineering Institute, Jiangsu, China) в соответствии с инструкциями производителя.

Статистический анализ

Все измерения были выполнены как минимум в трех экземплярах, и данные были представлены как среднее ± стандартное отклонение (SD). Для каждого состава были приготовлены три партии образцов. Для выбранных оценочных тестов средние значения всех протестированных составов сравнивали друг с другом с помощью однофакторного дисперсионного анализа с апостериорным сравнением Тьюки с .Уровень статистической значимости ( P ) был установлен на уровне <0,05.

Результаты

Подготовка КХГ

Кератин (восстановительный кератин) был извлечен из человеческих волос с использованием ТГА, а дисульфидные связи в естественном кератине человеческого волоса могут быть разрушены до тиолов [21]. Поэтому в раствор кератина добавляли перекись водорода для усиления образования гидрогеля. Кроме того, поскольку адгезивные свойства кератинового гидрогеля к язве были связаны с увеличением вязкости гидрогеля, в этом исследовании были изготовлены кератиновые гидрогели с различными концентрациями (KHG1 для 10%, KHG2 для 15% и KHG3 для 20%).

На рис. 1а показаны KHG после перевернутой вертикальной позы в течение 5 с. Подвижность КХГ снижалась с увеличением концентрации. Кроме того, на рис. 1b можно увидеть хорошую пластичность KHG2.

Рисунок 1.

Физико-химические свойства КХГ. ( A ) Фотографии KHG с различной концентрацией кератина: 10% (KHG1), 15% (KHG2) и 20% (KHG3). ( B ) Растяжка КХГ2. ( C ) СЭМ-изображения и ( D ) распределение пор по диаметру KHG.

Рисунок 1.

Характеристика KHG

Морфология KHG проверена с помощью SEM. Как показано на рис. 1c, можно наблюдать пористую структуру KHG.Послойная структура сверху вниз также видна на поперечном сечении, что является результатом сшивки молекул кератина. Кроме того, распределение диаметра пор KHG было проанализировано статистическим анализом с использованием программного обеспечения Image J (рис. 1d). Средний диаметр пор KHG1, KHG2 и KHG3 составлял ~ 39,17 мкм, 47,36 мкм и 86,73 мкм соответственно, что положительно коррелировало с концентрацией KHG.

Водопоглощение KHG в желудке важно из-за его адгезионных свойств и лечения язвы желудка, что может повлиять на вязкость гидрогеля, а желудочный сок, абсорбированный в KHG, может усугубить язву желудка.В связи с этим были исследованы водопоглощающие свойства КТГ, которые представлены на рис. 2а. Все КХГ показали ограниченную водопоглощающую способность в кислой среде (pH 1,2). Лиофилизированный KHG3 набухал в четыре раза после инкубации в течение 4 часов по сравнению с исходным KHG3, который увеличился до пяти раз через 48 часов. Кроме того, абсорбционная способность KHG снижалась с уменьшением концентрации кератина в KHG, что можно было объяснить разным размером пор и плотностью при различных концентрациях гидрогеля.

Рисунок 2.

( A ) Водопоглощающая способность и ( B ) модули упругости (G ’) и модули вязкости (G”) в зависимости от частоты для KHG. ( C ) Макроскопические фотографии желудков нормальных крыс и крыс с вызванной этанолом язвой после введения KHG2 в течение 2 часов. KHG2 специально прикрепляется к язве (красные стрелки) у крыс с язвой, вызванной этанолом, и язву можно наблюдать, удалив KHG2 из желудка.

Рисунок 2.

Реологические свойства KHG также были исследованы для определения линейных вязкоупругих характеристик образцов гидрогеля (рис.2б). Модуль упругости (G ‘) был больше модуля вязкости ( G ‘ ‘) во всех трех образцах в анализируемом частотном диапазоне, что указывает на то, что KHG демонстрирует типичное поведение вязкоупругих твердых тел [33]. Кроме того, как G ‘, так и G ’ KHG увеличивались с увеличением концентрации гидрогеля. Гелевая конструкция с более высоким содержанием полимера имеет более высокую прочность как эластичности, так и вязкости.

Оценка адгезионных свойств язвы

Свойства in vivo и к язве KHG оценивали непосредственно с использованием модели язвы желудка на крысах, которая была создана путем перорального введения абсолютного этанола с последующим пероральным введением KHG2 через зонд.Очевидные признаки, такие как кровотечение, отек слизистой оболочки и гиперемия, могут быть обнаружены в желудке крыс, индуцированных этанолом (рис. 2c), что указывает на то, что модель язвы крысы была успешно создана. Кроме того, KHG2 можно наблюдать на язве через 2 часа введения, а язву можно обнаружить после того, как KHG2 был удален из желудка. Параллельно KHG2 также скармливали здоровой крысе, и в тот же момент времени в желудке крысы не было обнаружено гидрогеля, что свидетельствует о том, что KHG обладают адгезивной специфичностью для язвы.

Для количественной оценки адгезионных свойств KHG при язве с помощью ОФЭКТ были обнаружены ¹³¹ I-меченные KHG, прикрепленные к индуцированной этанолом стенке желудка крысы. Оценивали стабильность ¹³¹ I-меченных KHG в стандартных буферных растворах с pH 1,2, 4,5 и 7,4. Активность, высвобождаемая из ¹³¹ I-меченых KHG, составляла менее 8,0% при pH 1,2 и pH 4,5 и менее 6,0% при pH 7,4 в течение 12 часов соответственно. На рис. 3а показаны гаммацинтиграфические изображения ¹³¹ I-меченных KHG у крыс с вызванной этанолом язвы и здоровых крыс.Радиоактивность со временем снижалась из-за перистальтики желудка. Кроме того, на рис. 3b показаны подсчеты радиоактивности ¹³¹ I-меченных KHG за 2 минуты в желудке в течение 12 часов. Приблизительно 42% из ¹³¹ I-меченного KHG1, 46% ¹³¹ I-меченного KHG2 и 51% из ¹³¹ I-меченного KHG3 задерживались в желудке крыс с язвенной болезнью, вызванной этанолом, через 6 часов, тогда как только приблизительно 18% из ¹³¹ I-меченого KHG2 было обнаружено в желудке здоровых крыс.Результаты показали, что KHG проявляют сильную адгезионную способность к язве, а сродство между KHG и язвой увеличивается с увеличением концентрации кератина.

Рисунок 3.

Гастроретентивность KHG in vivo . ( A ) Гаммацинтиграфические изображения ¹³¹ I-меченных KHG в вызванной этанолом язве и желудках здоровых крыс. ( B ) Подсчет радиоактивности за 2 мин ¹³¹ I-меченных KHG в желудках крыс.Значения являются средними ± стандартное отклонение ( n = 6). ( C ) Модули упругости (G ’) и модули вязкости (G”) в зависимости от частоты для KHG2 in vitro и in vivo .

Рисунок 3.

Гастроретентив KHG in vivo . ( A ) Гаммацинтиграфические изображения ¹³¹ I-меченных KHG в вызванной этанолом язве и желудках здоровых крыс. ( B ) Подсчет радиоактивности за 2 мин ¹³¹ I-меченных KHG в желудках крыс.Значения являются средними ± стандартное отклонение ( n = 6). ( C ) Модули упругости (G ’) и модули вязкости (G”) в зависимости от частоты для KHG2 in vitro и in vivo .

Язвенная адгезия KHG была связана с образованием гидрогеля высокой вязкости на месте кровотечения. Таким образом, мы также выявили реологические свойства покрытий КХГ на язве. Как показано на фиг. 3c, уровни G ‘и G ‘ KHG2 при язве желудка заметно увеличиваются по сравнению с таковыми из нативного KHG2.Результаты показали изменение реологических свойств KHG в месте кровотечения в желудке, что может способствовать их способности к заживлению язвы.

Лечение язв, вызванных этанолом

Терапевтический эффект язвенно-адгезивных KHGs на язве желудка также оценивался в этом исследовании. Желудки крыс с вызванной этанолом язвы, получавших или не получавших различные количества KHG2, и здоровых крыс были удалены после умерщвления в дни 1, 3 и 5, что было отображено цифровой камерой (рис.4а). Более очевидные признаки язвы, включая кровоизлияние, отек слизистой оболочки и гиперемию, были обнаружены в желудке крыс с вызванной этанолом язвой желудка в День 1 по сравнению с таковой в имитационной группе (здоровые крысы, которым вводили физиологический раствор). Кроме того, площадь язвы значительно уменьшилась после лечения KHG2 по сравнению с группой носителя (крысы с язвой, которым вводили физиологический раствор) ( P <0,01) (рис. 4b), и заживление язвы у крыс, получавших KHG2, также было значительно быстрее. чем у группы транспортных средств в дни 3 и 5 ( P <0.01). Между тем, степень язвы снизилась с 5,3 до 0,4 после лечения KHG2 в дозе 3,2 мл / кг в течение 5 дней (таблица 1). Однако не было существенной разницы в степени язвы между различными дозами KHG2, что указывает на то, что терапевтический эффект KHG на язву желудка зависит от степени покрытия язвы KHG, и избыточные KHG будут выведены из желудка, вероятно, из-за к опорожнению желудка. Кроме того, процент ингибирования (PI) в группе, получавшей KHG2, вырос до 97% через 5 дней (рис.4c), который доказал, что KHG способствуют заживлению язв in vivo . Однако не было существенной разницы в скорости заживления ран между группами, получавшими KHG2 с разными дозами, что указывает на то, что количество KHG, прикрепившихся к желудку, зависело в первую очередь от областей язвы, что ограничивало эффективность лечения.

Рисунок 4.

Терапевтический эффект KHG на вызванную этанолом язву желудка у крыс. ( A ) Макроскопическая фотография желудков здоровых крыс и крыс с вызванной этанолом язвой, получавших или не получавших различные дозы KHG2.( B ) Эффекты различных доз KHG2 на области язвы ( C ) и процент ингибирования (PI%). * P <0,05, ** P <0,01 по сравнению с группой носителя.

Рисунок 4.

Терапевтический эффект KHG на вызванную этанолом язву желудка у крыс. ( A ) Макроскопическая фотография желудков здоровых крыс и крыс с вызванной этанолом язвой, получавших или не получавших различные дозы KHG2. ( B ) Эффекты различных доз KHG2 на области язвы ( C ) и процент ингибирования (PI%).* P <0,05, ** P <0,01 по сравнению с группой носителя.

Таблица 1.

Распределение степеней у крыс в группе носителя и группе, обработанной KHG (среднее ± стандартное отклонение, n = 6).

Время .	Группа автомобилей .	Группа, получавшая KHGs / (мл / кг) .
Время .	Группа автомобилей .	0,8 .	1.6 .	3,2 .
День 1	5,6 ± 0,1	5,3 ± 0,1	5,1 ± 0,2	5,3 ± 0,2
День 3	4,1 ± 0,1	3,4 ± 0,3		3,2 ± 0,4
День 5	3,2 ± 0,2	0,3 ± 0,3	0,5 ± 0,2	0,4 ± 0,1

Время .	Группа автомобилей .	Группа, получавшая KHGs / (мл / кг) .
Время .	Группа автомобилей .	0,8 .	1,6 .	3,2 .
День 1	5,6 ± 0,1	5,3 ± 0,1	5,1 ± 0,2	5,3 ± 0,2
День 3	4,1 ± 0,1	3,4 ± 0,3		3.2 ± 0,4
День 5	3,2 ± 0,2	0,3 ± 0,3	0,5 ± 0,2	0,4 ± 0,1

Таблица 1.

Распределение степеней в группе носителя и группе, получавшей KHGs у крыс (среднее ± стандартное отклонение, n = 6).

Время .	Группа автомобилей .	Группа, получавшая KHGs / (мл / кг) .
Время .	Группа автомобилей .	0.8 .	1,6 .	3,2 .
День 1	5,6 ± 0,1	5,3 ± 0,1	5,1 ± 0,2	5,3 ± 0,2
День 3	4,1 ± 0,1	3,4 ± 0,3		3,2 ± 0,4
День 5	3,2 ± 0,2	0,3 ± 0,3	0,5 ± 0,2	0,4 ± 0,1

Время .	Группа автомобилей .	Группа, получавшая KHGs / (мл / кг) .
Время .	Группа автомобилей .	0,8 .	1,6 .	3,2 .
День 1	5,6 ± 0,1	5,3 ± 0,1	5,1 ± 0,2	5,3 ± 0,2
День 3	4,1 ± 0,1	3,4 ± 0,3		3.2 ± 0,4
День 5	3,2 ± 0,2	0,3 ± 0,3	0,5 ± 0,2	0,4 ± 0,1

Гистопатология ткани

Затем гистопатологию оценивали с помощью натяжения ткани желудка H&E и PAS (рис. 5). Группа носителя показала некоторое острое повреждение ткани желудка и разрушение слизистой оболочки желудка с сильным кровотечением, подслизистым отеком, дезорганизацией структуры желез и потерей эпителиального слоя.В имитационной группе наблюдалась гладкая слизистая оболочка желудка без потери железистой структуры желудка. Кроме того, группы, получавшие KHG, представляли более компактную слизистую оболочку желудка и меньше симптомов язвы по сравнению с группой носителя, а ткани язвы, обработанные KHG2, могут восстановиться от подслизистой оболочки, мышечной мышцы и слизистой оболочки в течение 5 дней.

Рисунок 5.

Влияние различных доз KHG2 на гистопатологию ткани желудка (окрашивание H&E и pas, масштабная линейка 500 мкм): плюс (+) означает потерю железистой структуры желудка, красная стрелка — отек желтая стрелка представляет дезорганизацию структуры железы, черная стрелка указывает на кровотечение для H&E, а зеленая стрелка — на PAS-положительное окрашивание (слизистая оболочка) на PAS.

Рисунок 5.

Влияние различных доз KHG2 на гистопатологию ткани желудка (окрашивание H&E и pas, масштабная линейка 500 мкм): плюс (+) означает потерю железистой структуры желудка, красная стрелка — отека, желтая стрелка представляет собой дезорганизацию структуры железы, черная стрелка указывает на кровотечение для H&E, а зеленая стрелка — на PAS-положительное окрашивание (слизистая оболочка) на PAS.

Метод окрашивания PAS использовался для оценки содержания гликопротеинов в слизистой оболочке желудка.Содержание гликопротеинов в слизистой оболочке желудка значительно снизилось у крыс с язвой (группа носителя) по сравнению с нормальными крысами (группа имитации) с положительным окрашиванием PAS. Пероральное введение KHG2 в различных дозах может увеличить содержание муцина, и более положительное окрашивание PAS на верхней части слизистой оболочки желудка наблюдалось в группе, получавшей KHG2, на 3-й день. Результат показал, что KHG может ускорять регенерацию желудка. слизистая оболочка, чтобы вызвать слой слизи.

Биохимические факторы ткани

Биохимические факторы ткани, включая супероксиддисмутазу (SOD), интерлейкин-6 (IL-6), активность малонового диальдегида (MDA) и общий белок в желудке, также были обнаружены для оценки терапевтического эффекта KHG.Количество общего белка и СОД в желудках в разных группах было определено и показано на рис. 6а и б. SOD и общий белок в желудке значительно снизились у крыс, получавших этанол, по сравнению с имитационной группой ( P <0,001), а введение KHG2 значительно повысило уровни общего белка и SOD. Нет существенной разницы в уровнях SOD и общего белка между группами, обработанными KHG2, и группой носителя на 5 день. Кроме того, на фиг. 6c и d показаны уровни IL-6 и MDA в разных группах.Уровни IL-6 и MDA в желудке значительно увеличились после лечения крыс этанолом ( P <0,01), а уровни IL-6 и MDA в ткани желудка снизились после обработки KHG2. Оба они вернулись к нормальному уровню через 5 дней после лечения KHG2. Результаты показали, что KHG могут улавливать кислородные радикалы для защиты ткани, опосредовать окислительный стресс и ингибировать образование воспалительных цитокинов для облегчения симптомов язвы желудка, вызванной этанолом.

Рисунок 6.

Влияние различных доз KHG2 на экспрессию биохимических факторов ткани: ( A ) общий белок гомогенатеи ткани желудка. ( B ) Супероксиддисмутаза, ( C ) интерлейкин-6 и ( D ) малоновый диальдегид желудков крыс после различных обработок. * P <0,05, ** P <0,01 по сравнению с фиктивной группой. ^# P <0.05, ^## P <0,01 по сравнению с группой носителя.

Рисунок 6.

Влияние различных доз KHG2 на экспрессию биохимических факторов ткани: ( A ) общий белок гомогенатеи ткани желудка. ( B ) Супероксиддисмутаза, ( C ) интерлейкин-6 и ( D ) малоновый диальдегид желудков крыс после различных обработок. * P <0,05, ** P <0,01 по сравнению с фиктивной группой.^# P <0,05, ^## P <0,01 по сравнению с группой носителей.

Обсуждение

Полимерные гидрогели широко используются для заживления ран и гемостаза из-за их превосходных свойств в поддержании смачиваемости и влажности, сохранении жидкостей организма и обеспечении тканеподобной структуры. Однако гидрогели обычно не использовались для лечения язвы желудка из-за перистальтики желудка и водянистой среды [16].Несмотря на то, что некоторые гидрогели применялись при язве желудка, эндоскопический катетер обычно использовался для лечения язвы в костюме [8–12]. В этом исследовании мы разработали пероральный гидрогель для ускорения заживления язвы, который может специально прилипать к язве без эндоскопического контроля. KHG могут прикрепляться к слизистой оболочке желудка и язве после перорального приема, но гидрогелевое покрытие на нормальной слизистой оболочке желудка (здоровая крыса) может быть удалено из-за перистальтики желудка. Кроме того, покрытия КХГ на области язвы могут долгое время удерживаться в желудке (рис.2в). После вскрытия желудков крыс через 2 ч введения KHG в желудках здоровых крыс наблюдалось небольшое количество KHG. Тем не менее, KHG прилипли к язвам у крыс, вызванных этанолом, в то время как язва также может быть обнаружена после удаления KHG из желудка. Результаты показали, что КХГ обладают способностью длительно прилипать к язве на ране.

Язвенный адгезивный механизм KHG также был исследован в данном исследовании. Как правило, опорожнение желудка от продуктов и лекарств достигается в течение 2 часов.Некоторые биоадгезивные полимеры обладают способностью продлевать время удерживания в желудке из-за их мукоадгезивных свойств. Однако биоадгезивные частицы, по-видимому, обладают более сильной удерживающей способностью по сравнению с гидрогелем из-за высокой удельной площади поверхности. Мы также изучали биоадгезивные свойства KHG на здоровых крысах (фиктивная группа на рис. 3a), и не было обнаружено KHG в желудке здоровых крыс после 2-часового перорального введения. KHG можно специфически наблюдать на язве желудка в тот же момент времени, что является результатом образования гидрогеля высокой вязкости на месте кровотечения.Вязкость KHG будет значительно увеличиваться после смешивания с кровью (рис. 3c), которая может сопротивляться опорожнению желудка и особенно долгое время покрывать язву.

Водопоглощение — еще одна особенность гидрогеля, однако гидрогель, используемый для лечения язвы желудка, должен обладать ограниченной способностью абсорбировать воду. Усиление барьера слизистой оболочки и ослепление желудочной кислоты может быть достигнуто с помощью адгезивного покрытия язвы из KHG, но язва будет проникать в кислую среду, если гидрогель может поглощать массу желудочной кислоты.Таким образом, гидрогель вместо лиофилизированных KHG вводился перорально для лечения язвы желудка в настоящем исследовании. KHGs показали ограниченную водопоглощающую способность в кислых условиях, а лиофилизированный KHG3 набухал до пяти раз в течение 48 часов, что указывало на то, что KHG3 (200 мг / мл кератинового гидрогеля) абсорбирует небольшое количество желудочной жидкости в желудке.

Гибкость гидрогеля необходима для лечения язвы желудка из-за моторики и вздутия желудка. Стенка желудка регулярно двигается во время опорожнения желудка.Нормальная емкость желудка человека колеблется от 0,25 до ~ 1,7 л в зависимости от положения тела, состояния окружающих внутренних органов и органов, количества и типа пищи, а также времени переваривания [34]. Следовательно, необходимы достаточные реологические свойства KHG, чтобы противостоять перистальтике и расширению желудка. Свежеприготовленные KHG показали хорошую пластичность in vitro (рис. 1b), в то время как реологические свойства KHG in vivo были улучшены из-за образования высоковязкого геля.

Помимо адгезионных свойств язвы, кератин был выбран для лечения язвы желудка в настоящем исследовании из-за их сильной способности к заживлению ран. Кератины, полученные из человеческих волос, пера и шерсти, используются для заживления ран [22, 24]. Таким образом, для ускорения язвы желудка использовались чистые кератины без лекарств или факторов роста. Степень язвы снизилась с 5,3 до 0,3 после лечения 0,8 мл / мг KHG2 в течение 5 дней, и ткани язвы могут восстановиться из подслизистой основы, мышечной ткани и слизистой оболочки.Результаты доказали сильную способность кератинов заживлять раны желудка. Однако не было отмечено значительных различий в степени язвы между различными дозами KHG2, что указывает на то, что терапевтический эффект KHG при язве желудка зависит в первую очередь от степени воздействия KHG на язву, а избыточные KHG будут вытеснены из желудка из-за опорожнение желудка.

Помимо эффекта заживления язвы, в этом исследовании KHG также показали терапевтический эффект на желудочное кровотечение. Фактически, превосходные гемостатические свойства кератина были описаны в предыдущем исследовании [25, 35].В то время как кератин был использован для лечения желудочного кровотечения в настоящем исследовании впервые. Гемостаз может быть обнаружен при удалении KHG из язвы желудка (рис. 2c), что объясняется тем фактом, что высоковязкий гель может образовываться при смешивании кератина с кровью, а затем оказывать давление, останавливающее кровотечение. Повторное кровотечение может произойти, когда функция герметизации нарушена. Хотя животная модель язвы желудка может быть успешно создана традиционными методами, животные модели язвенного кровотечения трудно контролировать.Таким образом, время кровотечения и масса кровопотери при язве желудка с лечением KHG и без него не оценивались в этом исследовании.

Кератин, выделенный из человеческих волос, использовался для гемостаза, заживления ран, доставки лекарств и культивирования клеток в предыдущих исследованиях [21, 25, 36], а также оценивалась биосовместимость кератина человеческого волоса, имплантированного подкожно и вводимого в мозг. исследованы. Результаты показали, что между контрольной и кератиновой группами не наблюдалось значительных гистопатологических различий основных органов (головной мозг, сердце, легкие, селезенка, почки и печень), а объем кератина со временем уменьшался, и большинство кератиновых гидрогелей деградировали in vivo в течение 28 дней после внутримозгового введения и подкожной имплантации [24, 37, 38].

Кроме того, гидрогели с высокой адгезией были успешно разработаны для регенерации тканей на основе адсорбции, теории механического сцепления, диффузии и электростатических взаимодействий [39]. Типичные гидрогели, миметики мидий, обладают сверхвысокой энергией адгезии на влажных биологических тканях с определенными сшивающими агентами, достигаемыми за счет димеризации катехолов [40, 41], и биоадгезивными супрамолекулярными гидрогелями желатина, получаемыми путем образования комплекса хозяин-гость между ароматическими остатками желатина и свободными диффузия фото-сшиваемых акрилированных мономеров β-циклодекстрина [42].Кроме того, прочный адгезивный гидрогель с высокой плотностью водородных связей образовался после включения «кластеров тройных водородных связей» в матрицу за счет уникального эффекта «распределения нагрузки» без какой-либо химической реакции [43]. В то время как KHG продемонстрировал сильную адгезию к поверхности язвы из-за образования высоковязкого геля, и новая стратегия создания адгезивного гидрогеля, представленная в настоящем исследовании.

Заключение

Таким образом, в этом исследовании кератин впервые был использован для лечения язвы желудка.По сравнению с гидрогелями, использованными в предыдущих исследованиях, кератиновые гидрогели можно вводить перорально напрямую без эндоскопического контроля из-за их адгезионных свойств к язве, которые могут прилипать к язве желудка из-за образования геля высокой вязкости и сопротивляться опорожнению желудка более чем 12 ч. Кроме того, KHG ускоряли заживление язвы желудка двумя способами. С одной стороны, после покрытия раны КХГ образовался слой компактного барьера, который может остановить кровотечение и предотвратить повреждение клеток эпителия кислотой желудка.С другой стороны, KHG облегчили симптомы язвы, вызванной этанолом желудка, включая кровотечение, отек, язву с помощью макроскопии и аномальной экспрессии IL-6, MDA и SOD. Можно предвидеть, что разработанный KHG окажет значительное влияние на лечение клинической язвы желудка в будущем.

Финансирование

Авторы выражают признательность за финансовую помощь, предоставленную Национальным фондом естественных наук Китая (11972099 и 31600770), Программой поддержки предприятий и инноваций для иностранцев, вернувшихся в Чунцин (cx2020079), Фондом приглашенных ученых ключевой лаборатории биореологической науки и технологий (Чунцин Университета), Министерства образования (CQKLBST-2017-008), предметом исследования и развития талантливых специалистов по преимущественной традиционной китайской медицине в городе Бицзе, провинция Гуйчжоу (RCJD2020-21), и проектами Национальной программы развития науки и технологий во время Двенадцатая пятилетка (2015BAI05B03).

Заявление о конфликте интересов . Ничего не объявлено.

Список литературы

Сёрейде

Торсен

Харрисон

и другие.

Прободная язвенная болезнь

Ланцет

2015

;

386

1288

—

Crowe

SE.

Инфекция Helicobacter pylori

N Engl J Med

2019

;

380

1158

—

Испанцы

Ян

Дж

Кроули

и другие.

Связь долгосрочного изъязвления анастомоза после желудочного обходного анастомоза по Ру с курением табака

JAMA Surg

2018

;

153

862

—

Чжан

Да

Ван

Мей

и другие.

Защитные эффекты полисахарида из Dendrobium nobile против вызванного этанолом повреждения желудка у крыс

Int J Biol Macromol

2018

;

107

230

—

Чан

Леунг

Язвенная болезнь

Ланцет

2002

;

360

933

—

Мальфертайнер

Чан

McColl

KE.

Язвенная болезнь

Ланцет

2009

;

374

1449

—

Laine

Кровотечение из верхних отделов желудочно-кишечного тракта, вызванное язвенной болезнью

N Engl J Med

2016

;

374

2367

—

Maeng

Bang

Ли

и другие.

Эндоскопическое применение гидрогеля EGF-хитозана для ускоренного заживления пептических язв желудочно-кишечного тракта и язв, вызванных мукозэктомией

J Mater Sci: Mater Med

2014

;

573

—

ся

Чжан

и другие.

Биоадгезивные гидрогели, демонстрирующие pH-независимое и сверхбыстрое гелеобразование, способствуют заживлению язвы желудка у свиней

Sci Transl Med

2020

;

eaba8014

.10

Shan

Тан

Лю

и другие.

Разработка термочувствительного гидрогеля хитозан / глицерофосфат / коллаген для эндоскопического лечения язвы, вызванной мукозэктомией

Mater Sci Eng C

2019

;

103

109870

.11

Lorenzo ‐ Zúñiga

Boix

Морено де Вега

и другие.

Техника эндоскопического экранирования с использованием недавно разработанного гидрогеля для предотвращения термических повреждений в двух экспериментальных моделях

Дайджест Endosc

2017

;

702

—

.12

Maeng

Так

Ким

Дж

и другие.

rhEGF-содержащий термочувствительный и мукоадгезивный полимерный золь – гель для эндоскопического лечения язвы желудка и кровотечений

J Biomater Appl

2014

;

1113

—

,13

Чанг

C-H

Лин

Y-H

Yeh

C-L

и другие.

Наночастицы, включенные в pH-чувствительные гидрогели в качестве доставки амоксициллина для уничтожения Helicobacter pylori

Биомакромолекулы

2010

;

133

—

.14

Чжао

C-C

Чжу

и другие.

Пептид-гидрогели, нагруженные ресвератролом, подавляют образование рубцов при заживлении ран за счет подавления воспаления

Regen Biomater

2020

;

—

107

.15

Ян

Вт

и другие.

Обогащенная тромбоцитами плазма в сочетании с инъекционным гидрогелем гиалуроновой кислоты для регенерации свиного хряща: последующее наблюдение через 6 месяцев

Regen Biomater

2020

;

—

,16

Лю

Дж

Панг

Чжан

и другие.

Триггерные жесткие гидрогели для лекарственных форм, резидентных в желудке

Нац Коммуна

2017

;

.17

Лю

Steiger

Лин

и другие.

Устройство сменного гидрогеля

Нац Коммуна

2019

;

—

.18

Эгхольм

Thim

Мадсен

и другие.

Неблагоприятные сердечные события, связанные с гастроскопией, и осложнения, связанные с кровотечением, у пациентов, получавших коронарные стенты и двойную антитромбоцитарную терапию

Endosc Int Open

2016

;

E527

—

,19

Наби

Осложнения терапевтической гастроскопии / колоноскопии, кроме резекции

Best Practical Res Cll Ga

2016

;

719

—

.20

Silvis

Небель

Роджерс

и другие.

Эндоскопические осложнения: результаты исследования Американского общества эндоскопии желудочно-кишечного тракта 1974 г.

Jama

1976

;

235

928

—

,21

Кан

Дж

Вт

Цин

и другие.

Изучение механизмов солюбилизации рекомбинантного кератина с повышенной способностью к заживлению ран

Chem Mater

2020

;

3122

—

.22

Гао

Вт

Дэн

Дж

и другие.

Рекомбинантные наночастицы кератина человеческого волоса ускоряют заживление кожных ран

Интерфейсы приложений ACS

2019

;

18681

—

.23

L-C

Хуанг

Y-Z

Се

H-Q.

Прогресс в разработке биоматериалов для заживления кожных ран

Regen Biomater

2017

;

325

—

.24

Ван

Дж

Хао

Luo

и другие.

Перо-кератиновый гидрогель для заживления ран: подготовка, заживляющий эффект и оценка биосовместимости

Colloid Surf B

2017

;

149

341

—

.25

Luo

Хао

Чен

и другие.

Разработка и оценка наночастиц кератина для использования в качестве кровоостанавливающего средства

Mater Sci Eng C

2016

;

352

—

,26

Вт

Gao

Кан

Дж

и другие.

Синтез и изготовление кератин-конъюгированного инсулинового гидрогеля для улучшения заживления ран

Colloid Surf B

2019

;

175

436

—

.27

Ван

Чжан

и другие.

Защитный эффект фукоидана морского огурца (Acaudina molpadioides) против вызванного этанолом повреждения желудка

Food Chem

2012

;

133

1414

—

,28

млн лет

Elliott

Чирино

и другие.

Тромбоциты модулируют заживление язвы желудка: роль эндостатина и высвобождение фактора роста эндотелия сосудов

Proc Natl Acad Sci U S A

2001

;

6470

—

,29

Cheng

Чен

Чжай

и другие.

Разработка наночастиц кератина для контролируемой мукоадгезии желудка и высвобождения лекарств

J Nanobiotechnol

2018

;

.30

Kalayci

Кодор

Кулоглу

и другие.

Сравнение терапевтических эффектов цитрата силденафила, гепарина и нейропептидов на модели язвы желудка, вызванной уксусной кислотой, на крысах

Life Sci

2017

;

186

102

—

.31

Вт

Яо

Ниу

и другие.

Защитный эффект δ-амирона против язвы желудка, вызванной этанолом, у мышей

Иммунобиология

2015

;

220

798

—

806

.32

Салама

Гварам

АльРашди

и другие.

Комплекс морфолина цинка предотвращает язвы желудка, вызванные HCl / этанолом, у крыс модели

Научный сотрудник

2016

;

29646

.33

Барбуччи

Лампони

Borzacchiello

и другие.

Гидрогель гиалуроновой кислоты в лечении остеоартрита

Биоматериалы

2002

;

4503

—

.34

Ферруа

Сингх

Р.

Моделирование динамики жидкости в желудке человека для понимания процесса пищеварения

J Food Sci

2010

;

151

—

.35

Ван

Дж

Хао

Luo

и другие.

Разработка наночастиц кератина пера и исследование их гемостатической эффективности

Mater Sci Eng C

2016

;

768

—

.36

Гонг

Ван

и другие.

Инкапсулированный в виде наночастиц гидрогель ядро-оболочка для доставки на место BMSC защищает от перегрузки железом и увеличивает функциональное восстановление

J Control Release

2020

;

320

381

—

.37

Luo

Го

Ян

и другие.

Гидрогели in situ, улучшающие послеоперационное функциональное восстановление за счет снижения перегрузки железом после внутримозгового кровоизлияния

Int J Pharm

2017

;

534

179

—

0,38

Ван

Дж

Хао

Luo

и другие.

Нановолокна, смешанные с кератозом и поливиниловым спиртом: оценка производства и биосовместимости

Mater Sci Eng C

2017

;

212

—

.39

Чжан

Лю

Чжан

и другие.

Последние достижения в области применения высокоадгезивных гидрогелей в качестве повязок для ран

Биомакромолекулы

2020

;

3966

—

.40

Чжао

Wei

Фэн

и другие.

Гидрогели, имитирующие мидии, с определенными сшивающими агентами, достигаемыми посредством контролируемой димеризации катехинов, демонстрирующие прочную адгезию для влажных биологических тканей

Chem Commun

2017

;

12000

—

.41

Ким

и другие.

Клей-гидрогель на основе белка миметика мидий

Биомакромолекулы

2014

;

1579

—

.42

Фен

Wei

Лин

и другие.

Механически упругие, инъекционные и биоадгезивные супрамолекулярные гидрогели желатина, сшитые слабыми взаимодействиями хозяина и гостя, способствуют инфильтрации клеток и регенерации тканей in situ

Биоматериалы

2016

;

101

217

—

.43

Чен

Дж

Ван

и другие.

Адгезивный гидрогель с эффектом распределения нагрузки в качестве тканевых повязок для доставки лекарств и клеток

Adv Mater

2020

;

2001628

Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/), которая разрешает неограниченное повторное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии, что оригинал работа правильно процитирована.

Работают ли кератиновые добавки для волос?

Некоторые люди принимают кератиновые добавки для роста волос, но ТКТКТК.

Кредит изображения: dragana991 / iStock / GettyImages

Кератин — это природный белок, который составляет и защищает ваши волосы, ногти и кожу. Некоторые люди выбирают кератиновые процедуры для волос в салонах, в то время как другие покупают «кератиновые витамины» — кератины в форме добавок — в аптеках или в Интернете.

Вот что вам следует знать о добавках кератина, в том числе о побочных эффектах таблеток с кератином и о том, следует ли вам принимать кератин для роста волос.

Для чего используются кератиновые добавки?

Многие кератиновые добавки производятся путем извлечения кератина из копыт, перьев или шерсти животных. Большинство людей принимают их, потому что верят, что порошок или таблетки помогут сделать их волосы и ногти сильнее, длиннее и ярче.

Сегодня на рынке представлено множество видов добавок для волос и ногтей. Биотин, например, считается добавкой, которая помогает производить кератин, тем самым укрепляя волосы и ногти и способствуя их росту.

Кератин против биотина

Кератин — это белок, а биотин — это витамин. Кератин — это структурный белок, который на самом деле содержится в ваших волосах, ногтях и коже. Биотин, с другой стороны, — это другое название витамина B7, который помогает организму расщеплять кератин, чтобы его можно было использовать в волосах, коже и ногтях.

Работают ли кератиновые добавки?

Поскольку кератин является структурным белком, который наш организм использует для создания волос, использование кератина для роста волос имеет смысл на бумаге.Но, к сожалению, нет никаких доказательств того, что это действительно работает.

То же самое и с биотином. Ваше тело нуждается в этом питательном веществе, чтобы поддерживать здоровье волос, кожи и ногтей, но исследований, показывающих, что биотиновые добавки помогают при выпадении волос, недостаточно.

Согласно обзору, опубликованному в августе 2017 года в Skin Appendage Disorders , добавки биотина могут быть полезны людям с состояниями, вызывающими дефицит биотина, но нет никаких доказательств того, что они работают для людей, которые в остальном здоровы.

Имейте в виду, что по данным клиники Мэйо недостаток биотина случается редко. Согласно Национальной медицинской библиотеке США (NLM), витамин естественным образом содержится в таких продуктах, как бананы, яйца и молоко, поэтому большинство людей получают его достаточное количество с пищей.

Дефицит биотина может поражать беременных, недоедающих, быстро теряющих вес, длительное время кормящих через зонд или имеющих наследственное заболевание. Считается, что курение сигарет также может способствовать снижению уровня биотина в крови, согласно NLM.

Другие симптомы дефицита биотина включают:

Сыпь вокруг глаз, носа и рта
Депрессия
Галлюцинации
Покалывание в руках и ногах

Если вы считаете, что вам может потребоваться добавка биотина, вам следует обсудить это со своим врачом.

Побочные эффекты кератиновых добавок

Наибольшую опасность кератин несет салонный уход, содержащий формальдегид. Средства, которые наносятся на волосы снаружи, а затем обрабатываются высокой температурой, например, для выпрямления волос, вызывают воздействие формальдегида, согласно U.S. Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов.

Формальдегид является сильнодействующим газом с запахом и представляет серьезную опасность для здоровья, как указано в Управлении по охране труда. Если вы подвергнетесь воздействию газа при нанесении на волосы, он может попасть в легкие или глаза. Затем это может вызвать проблемы с дыханием, такие как хрипы и кашель, а также кожную сыпь и зуд. Воздействие формальдегида также считается риском рака.

Что касается пероральных добавок кератина и биотина, СШАНациональная медицинская библиотека считает, что они вполне безопасны. Клиника Майо сообщает, что дозы до 10 миллиграммов не вызывают каких-либо негативных эффектов.

Помните о приеме добавок биотина, если вы принимаете лекарства, которые изменяются печенью, так как эта добавка может минимизировать действие лекарств, которые вы принимаете. Некоторыми примерами этих лекарств могут быть клозапин, циклобензаприн и флувоксамин.

Предупреждение

Посоветуйтесь со своим врачом, прежде чем принимать какие-либо новые добавки, особенно если вы принимаете другие лекарства.

Иммуномодулирующая роль кератина 76 при раке полости рта и желудка

Кератин 76 экспрессируется в эпителии полости рта и желудка

Для анализа экспрессии и функции Krt76 мы использовали мутантных мышей Krt76 (Krt76 ^{tm1a (KOMP) Wtsi}), полученных с помощью Wellcome Проект генетики мышей Института Сэнгера ^13,16,17 (рис. 1а). В результате сплайсинга захватывающего элемента lacZ с экзоном 2 Krt76 гомозиготные мыши не экспрессируют Krt76 (Krt76 ^{— / —}).Гетерозиготных мышей (Krt76 ^+/-), экспрессирующих одну копию Krt76 и одну копию репортера lacZ под контролем эндогенного промотора, использовали для визуализации экспрессии Krt76 в ротовой полости и желудке. Krt76 впервые экспрессируется в эмбриональный день 17.5 (E17.5) на языке, нёбе и желудке (Fig. 1b, c), и экспрессия продолжается в этих местах на протяжении всей взрослой жизни (Fig. 1e-i). Экспрессия на языке происходила преимущественно на дорсальной поверхности и латеральной границе с меньшим количеством клеток, меченных на вентральном языке (рис.1c – e). Krt76 также сильно экспрессировался во вкусе (рис. 1b, f). Экспрессия наблюдалась в слизистой оболочке щеки, но не на внешней губе, определяя четкую границу между двумя эпителиями (рис. 1g). Экспрессия Krt76 ограничена супрабазальными слоями во всех оральных эпителиях (Fig. 1c-g, i).

Рис. 1

Кератин 76 экспрессируется в оральном эпителии и плоском желудке. — стратегия нокаута Krt76. Мыши Krt76 ^{— / —} были получены путем разрушения гена Krt76 с помощью конструкции, направленной на нокаут первого аллеля (вставка с репортерной меткой и условным потенциалом).У этих животных ген акцептора сплайсинга-репортер LacZ интегрирован в ген нацеливания между экзоном 1 и 2, что позволяет отслеживать экспрессию гена, нарушая при этом экспрессию белка Krt76. b Окрашивание X-gal (синий) бета-галактозидазы, экспрессируемой под контролем промотора Krt76 в ротовой полости и желудке (стрелки) эмбрионов мышей Krt76 ^+/- на E17.5. c Иммунофлуоресцентная маркировка антителами против Krt76 (зеленый) и анти-Krt14 (красный) в ротовой полости и желудке эмбрионов мыши на E17.5. Нижний ряд: левая панель — это увеличенное изображение заштрихованной области на правой панели. d Полное окрашивание X-gal репортерных мышей Krt76 ^+/- на постнатальный день 2 (P2) показывает экспрессию Krt76 на спинном и боковом языке с частичной экспрессией на вентральном языке. e — h Окрашивание X-gal (синий) бета-галактозидазы, экспрессируемой под контролем промотора Krt76 на языке ( e ), небе ( f ), губах и слизистой оболочке щек ( g ) и в желудке ( ч ) взрослых мышей Krt76 ^+/-. h Желудок мыши подразделяется на две основные гистологически различные области: плоский желудок, выстланный многослойным плоским эпителием, и железистый желудок, отделенный ограничивающим гребнем от многослойного плоского эпителия плоского желудка. Экспрессия Krt76 ограничена областью плоскоклеточного желудка. i Иммунофлуоресцентное мечение антителами против Krt76 (зеленый) и против Krt14 (красный) из тканей взрослых мышей дикого типа, подтверждающее специфичность как антител против Krt76, так и окрашивания X-gal.Образцы контрастировали с помощью ядерного красителя DAPI (4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндол). Пунктирная линия очерчивает базальную мембрану. j Krt76 мРНК qRT-PCR анализ взрослых тканей относительно Gapdh ( n = 3 мыши, показаны средние значения ± s.e.m.). Масштабные полосы = 500 мкм ( b , c ), 100 мкм ( e — i )

Желудок мыши состоит из двух четко определенных областей: негландулярного предсердия (также известного как плоский желудок, который соединяется с пищеводом) и железистым желудком.Экспрессия Krt76 ограничена надбазальными слоями плоского желудка (рис. 1h). Экспрессия Krt76 была дополнительно подтверждена маркировкой антител (фиг. 1c, i) и qRT-PCR (фиг. 1j).

Потеря Krt76 приводит к увеличению лимфатических узлов и селезенки

Хотя ранее сообщалось, что потеря Krt76 приводит к гиперплазии буккального эпителия ¹⁰, мы не наблюдали гистологических аномалий языка или предсердия и явных изменений эпителия. пролиферация у мышей Krt76 ^{— / —}, по оценке с помощью маркировки EdU (рис.2а – в). Однако в возрасте от 4 до 8 месяцев у всех мышей Krt76 ^{— / —} спонтанно развивалась большая киста (до 17 мм в диаметре) между нижней челюстью и передними конечностями (Fig. 2d-f). Каждая киста была заполнена жидкостью и прилегала к слюнной железе (рис. 2g). Иммунофлуоресцентное окрашивание на B220 (CD45R) и CD3 выявило присутствие B- и T-клеток соответственно, установив, что кисты были увеличенными поднижнечелюстными лимфатическими узлами (рис. 2h, i). Проточно-цитометрический анализ популяций лимфоцитов подтвердил, что клетки кисты были зрелыми Т-клетками CD4 ⁺ или CD8 ⁺ (рис.2j). По сравнению с гетерозиготными контролями (Krt76 ^+/-), лимфатические узлы в других участках тела также были увеличены в размере (рис. 2k), хотя Krt76 не экспрессировался в контрольных лимфатических узлах (дополнительный рис. 1a-b). . В соответствии с увеличением размера лимфатических узлов, абсолютное количество клеток брыжеечных, подчелюстных, подмышечных и паховых лимфатических узлов у мышей Krt76 ^{— / —} увеличивалось в 2,2–3,9 раза по сравнению с контрольными гетерозиготными однопометниками (рис. .2л).

Рис. 2

Потеря Krt76 приводит к увеличению лимфатических узлов и селезенки, не затрагивая гомеостаз эпителия языка и желудка. Иммуноокрашивание ( a ) и количественная оценка ( b ) клеток, меченных EdU, на мм эпителия языка и плоскоклеточного желудка ( n = 3 мыши / генотип, 2 среза / мышь и> 6 полей, количественно определяемых на срез, означает ± sem показаны). c Срезы, окрашенные гематоксилин-эозином (H&E). d Krt76 ^{— / —} 6-месячная мышь с кистой шеи (отмечена стрелкой). e Средний возраст (± sem) появления макроскопических лимфоидных кист шеи у мышей Krt76 ^{— / —} ( n = 16) и контрольных мышей ( n = 41) (**** p ≤ 0,0001 , непарный т -тест). f Макроскопические изображения подчелюстных лимфатических узлов от контрольных мышей и мышей Krt76 ^{— / —} и кисты от мышей Krt76 ^{— / —}. Изображения представляют 9 мышей / генотип. г Окрашенные гематоксилином-эозином срезы лимфоидной кисты шеи внутри лимфатических узлов (ЛУ) на ранней (слева) и продвинутой (справа) стадиях, рядом с слюнными железами (SG). ч, i Иммунофлуоресцентное окрашивание лимфатических узлов и срезов лимфоидной кисты ( ч ) анти-B220 (маркер В-клеток) и ( i ) анти-CD3 (маркер Т-клеток) с контрастным красителем DAPI. j Типичные точечные графики проточной цитометрии, показывающие популяции Т-клеток из тимуса (CD4 ⁺ и CD8 ⁺), подчелюстных лимфатических узлов (CD4 ⁺ или CD8 ⁺) и лимфоидной кисты шеи (CD4 ⁺ или CD8 ⁺, как лимфатические узлы) от мышей Krt76 ^{— / —} и контрольных мышей, показывающие проценты от общего количества живых клеток ( n = 3 эксперимента, n = 4 мыши / эксперимент / генотип). k Лимфатические узлы от контрольных мышей и мышей Krt76 ^{— / —}. Изображения представляют 9 мышей каждого генотипа. l Количественная оценка общего абсолютного числа клеток в лимфатических узлах контрольных мышей и мышей Krt76 ^{— / —}. m, n Размер тимуса ( m ) и количество клеток тимуса ( n ) у контрольных мышей и мышей Krt76 ^{— / —}. o Репрезентативная фотография вилочковой железы контрольных мышей и мышей Krt76 ^{— / —}. p, q Вес селезенки ( p ) и абсолютное количество клеток селезенки ( q ) у контрольных мышей и мышей Krt76 ^{— / —}. r Репрезентативная фотография селезенки контрольных мышей и мышей Krt76 ^{— / —}. с Общая масса тела контрольных ( n = 27) и Krt76 ^{— / —} ( n = 10) мышей. l, m, n, p, q mean ± sem, * p ≤ 0,05, ** p ≤ 0,01, *** p ≤ 0,001, **** p ≤ 0,0001, непарный t -тест, n = 4 мыши / генотип, измерено в двух экземплярах, и эксперимент повторен дважды. Масштабные линейки: 100 мкм ( a , c , g — i ), 500 мкм ( f , k , o , r ).Поднижнечелюстной, Аксиллярный, Мезентериальный, Паховый

Никаких изменений в размере вилочковой железы или клеточности не наблюдалось (Рис. 2m – o). Однако мыши Krt76 ^{— / —} имели увеличенную селезенку с увеличением в 2,2 раза количества клеток в селезенке (рис. 2p – r). Кроме того, взрослые мыши Krt76 ^{— / —} всегда весили меньше, чем контрольные мыши (рис. 2s).

Мы пришли к выводу, что потеря Krt76 приводит к спленомегалии и лимфаденопатии, что свидетельствует о системном воспалении.

Увеличение эффекторных и регуляторных Т-клеток

Для анализа воспалительного фенотипа мышей Krt76 ^{— / —} был проведен проточно-цитометрический анализ популяций иммунных клеток. Процент общего количества лимфоцитов, которые были В-клетками (B220 ⁺ TCRβ ^—), был увеличен в лимфатических узлах Krt76 ^{— / —} мыши (дополнительный рис. 1c-d) по сравнению с гетерозиготным контролем. Процент Т-клеток (TCRβ ⁺ CD3 ⁺ CD4 ⁺), которые были эффекторными Т-клетками (CD4 ⁺ CD44 ^{высокий} CD62L ^низкий), был значительно увеличен в селезенке и лимфатических узлах (рис.3а). Известно, что эффекторные Т-клетки играют важную роль в противоопухолевом иммунитете ¹⁸. Также наблюдалось значительное увеличение регуляторных Т-клеток (Tregs; TCRβ ⁺ CD4 ⁺ CD3 ⁺ Foxp3 ⁺ ¹⁹) в лимфатических узлах и тимусе мышей Krt76 ^{— / —}, но не в селезенке (рис. 3б). Treg являются мощными противовоспалительными клетками, которые, помимо других функций, препятствуют противоопухолевому иммунному ответу при различных раковых заболеваниях ²⁰.

Рис. 3

Потеря Krt76 приводит к локальному и циркулирующему увеличению цитокинов и экспансии Treg. a, b Резюме проточно-цитометрического анализа% эффекторных Т-клеток (CD44 ^{высокий} CD62L ^низкий) ( a ) и Foxp3 ⁺ Treg ( b ) в целом TCRβ ⁺ CD3 ⁺ CD4 ⁺ Т-клеток в тимусе (Thy), селезенке (Spl) и лимфатических узлах (LN; sLN, подчелюстные лимфатические узлы) от контрольных мышей и мышей Krt76 ^{— / —} ( n = 4 мыши / генотип, среднее ± с.э.м., непарный т -тест). c, d Уровни цитокинов в сыворотке крови ( c ) и жидкости кисты ( d ) контрольных мышей и мышей Krt76 ^{— / —}, оцененные с помощью анализа CBA ( n = 4 мыши на генотип; эксперимент повторен дважды, среднее ± средн., непарный t -тест). Те же измерения сыворотки крови мышей Krt76 ^{— / —} показаны в c и d . e Количественная RT-PCR мРНК цитокинов относительно Gapdh в эпителии языка и плоскоклеточного желудка ( n = 4 мыши / генотип, среднее ± s.Эм. биологических и технических троек; непарный т -тест). f, g Репрезентативные изображения окрашенных CD45 (зеленый) и Keratin14 (красный) срезов кожи, языка и плоского эпителия желудка ( f ) и количественная оценка инфильтрирующих лейкоцитов CD45 ⁺ / мм ² области стромы ( г ). Область стромы соответствует области между эпителием и белой пунктирной линией; n = 3 мыши на условие, 2 среза на мышь и> 4 микроскопических изображения на мышь, означает ± s.e.m., *** p ≤ 0,001, **** p ≤ 0,0001, непарный t-критерий). * p ≤ 0,05; ** p ≤ 0,01; *** p ≤ 0,001; *** p ≤ 0,001; нс не имеет значения. Масштабные линейки: 100 мкм

Изменения в уровнях эффекторных Т-клеток, Т-клеток и В-клеток коррелировали с поразительной активацией циркулирующих IL-6, IL-10 и TNFα (фиг. 3c). В жидкости внутри лимфоидных кист мышей Krt76 ^{— / —} также было значительно повышено содержание IL-6, IL-10 и TNFα (рис.3d). Уровни IFNγ, IL-2 и IL-4 не изменились (фиг. 3c). TNFα, как известно, стимулирует экспансию Treg ²¹.

Чтобы проверить, приводит ли потеря Krt76 к локальному воспалению, мы измерили уровни мРНК цитокинов на языке и на плоском желудке. Это выявило значительную активацию TNFα на языке и IL-4 и TSLP в плоском желудке (рис. 3e). В соответствии с этим локальным увеличением продукции цитокинов, общий инфильтрат иммунных клеток (общий CD45 ⁺ клеток) был значительно увеличен на языке и плоскоклеточном желудке по сравнению с гетерозиготным контролем (рис.3е, ж). Мы также подтвердили ранее сообщенное увеличение воспалительного инфильтрата кожи ^12,13 (рис. 3f, g).

Взятые вместе, эти данные демонстрируют, что потеря Krt76 приводит к местному и системному воспалению.

Характеристика Treg и эффекторных T-клеток

Чтобы выяснить, различаются ли функциональные возможности Treg и T-эффекторных клеток у мышей Krt76 ^{— / —} и контрольных мышей, мы провели тесты супрессии in vitro (рис.4; дополнительный рис.2). Treg выделяли из селезенки контрольных мышей и мышей Krt76 ^{— / —} и совместно культивировали в различных соотношениях с CFSE-меченными CD4 ⁺ CD25 ^— Т-клетками-респондентами (Tresp), которые включают популяцию эффекторов T. Подавление пролиферации измеряли с помощью проточной цитометрии (рис. 4a, b). Tregs Krt76 ^{— / —} ингибировали пролиферацию Tresp более эффективно, чем контрольные Treg, независимо от того, были ли Tresp от контрольных (рис. 4b) или мышей Krt76 ^{— / —} (дополнительный рис.2а). Кроме того, пролиферативная активность Krt76 ^{— / —} Tresp в отсутствие Treg была ниже, чем у контрольного Tresp (фиг. 4c).

Рис. 4

Фенотип и подавляющая функция Krt76 ^{— / —} Tregs. a Репрезентативные графики из анализа супрессии с участием различных соотношений Tresp к Treg, показывающие профиль CFSE, количественно определенный с помощью проточной цитометрии, после стробирования по клеткам CD4 ⁺. Это иллюстрирует дозозависимое подавление пролиферации CD4 ⁺ CD25 дикого типа ^— Tresp в присутствии контрольных или Krt76 ^{— / —} Treg. b Совокупные данные, показывающие% подавления Tresp контроля при каждом соотношении Tresp: Treg в присутствии контроля или Krt76 ^{— / —} Treg. Среднее ± стандартное отклонение, два независимых эксперимента, 2-сторонний дисперсионный анализ, p <0,0001, нелинейная регрессия (аппроксимация кривой) подавления Treg. c Репрезентативные графики профилей Tresp CFSE после стробирования по клеткам CD4 ⁺, иллюстрирующие пролиферацию Tresp от Krt76 ^{— / —} и контрольных мышей в отсутствие Treg. d Уровни цитокинов в среде для культивирования клеток для каждого соотношения Tresp: Treg, оцененные с помощью анализа CBA (средние значения ± средн., Несколько тестов t и двухфакторный дисперсионный анализ, каждое условие культивирования в трех повторностях, измерено в двух экземплярах, эксперимент повторен дважды). e Сводка проточного цитометрического анализа% CD39 ⁺ и CD73 ⁺ Treg из общего количества Treg (CD4 ⁺ CD25 ⁺ Foxp3 ⁺) в селезенке (Spl), лимфатических узлах (LN) и подчелюстных. LN (sLN) от контрольных мышей и мышей Krt76 ^{— / —}. f, g Максимальная интенсивность флуоресценции (MFI) экспрессии CD39, CD73 ( f ) и Foxp3 ( g ) в CD4 ⁺ CD25 ⁺ Foxp3 ⁺ Treg ( n = 4 мыши / генотип, эксперимент повторен дважды, среднее ± средн., непарный t -тест). * p ≤ 0,05; ** p ≤ 0,01; *** p ≤ 0,001; **** п ≤ 0,0001; нс не значимо

Более высокая подавляющая способность Krt76 ^{— / —} Treg коррелировала с повышенной способностью подавлять экспрессию провоспалительных цитокинов IFNγ и IL17 и противовоспалительного цитокина IL-10, независимо от того, были ли клетки Tresp из контроль (рис.4d) или мышей Krt76 ^{— / —} (дополнительный рис. 2b). Tregs от мышей Krt76 ^{— / —} экспрессировали более высокие уровни маркеров супрессии Treg CD39 и CD73 по сравнению с контрольными Treg (фиг. 4e, f). Известно, что Treg CD39 ⁺ подавляют пролиферацию Т-клеток и продукцию воспалительных цитокинов более эффективно, чем Treg CD39 ²². Различия между свойствами Treg у мышей Krt76 ^{— / —} и контрольных мышей не отражали различий в уровнях экспрессии Foxp3 (рис.4г).

Мы пришли к выводу, что Tregs от мышей Krt76 ^{— / —} обладают усиленной подавляющей функцией, а Tresp менее пролиферативны по сравнению с клетками от контрольных мышей.

Повышенная заболеваемость опухолями у мышей Krt76

^{— / —}

Чтобы определить, влияет ли потеря Krt76 непосредственно на заболеваемость опухолью в полости рта, мы обработали контроль (Krt76 ^{+ / +} дикого типа и гетерозиготный Krt76 ^{+ / —}) и Krt76 ^{— / —} с синтетическим канцерогеном 4NQO ¹⁴ (рис.5а), который имитирует канцерогенные эффекты употребления табака и алкоголя ¹⁵. У мышей дикого типа 4NQO вызывает карциному в ротовой полости и пищеводе, но не в остальной части пищеварительного тракта ²³. Мыши получали 100 мкг / мл 4NQO с питьевой водой в течение 16 недель, и в течение 28 недель наблюдали за появлением и прогрессированием поражений (рис. 5а). Гиперплазия спинного языка стала очевидной к 6 неделям, а к 10 неделям у мышей появились локализованные белые поражения, соответствующие дисплазиям (рис.5а – в). С 16 недель полные OSCC начали появляться во всех областях ротовой полости (рис. 5b, c), а к 22 неделе у всех мышей развилась по крайней мере одна опухоль (рис. 5f). Развитие опухолей было сходным у самцов и самок мышей.

Рис. 5

Распространенность опухолей языка и плоскоклеточного желудка у мышей Krt76 ^{— / —}. a Схема протокола туморогенеза 4NQO. b Типичные макроскопические изображения каждой стадии развития опухоли языка. c, d Типичные изображения окрашивания гематоксилином и эозином (H&E) ( c ) и окрашивания X-gal (синий) ( d ) и соответствующие макроскопические изображения языка контрольной группы ( n = 41 мышь) и Krt76 ^{— / —} мышей ( n = 16 мышей).Окрашивание X-gal используется для визуализации экспрессии Krt76. e Иммуноокрашивание на Krt76 (зеленый) и лорикрин (красный) (маркер терминальной дифференцировки) на участке языка с двумя опухолями, одна из которых экспрессирует Krt76. f Заболеваемость опухолями в Krt76 ^{+ / +} ( n = 14, медиана = 17 недель), Krt76 ^+/− ( n = 27, медиана = 16 недель) и Krt76 ^{— / —} мышей ( n = 16 мышей, медиана = 10,5 недель) (нет значимых различий между Krt76 ^{+ / +} дикого типа и гетерозиготным Krt76 ^+/- в контроле; **** p <0.0001 для Krt76 ^{— / —} по сравнению с обоими контролями; односторонний дисперсионный анализ, критерий Мантела – Кокса и критерий Грехана – Бреслоу – Вилкоксона). г Заболеваемость плоскоклеточными опухолями желудка в контроле (Krt76 ^{+ / +} и Krt76 ^+/-) ( n = 16) и Krt76 ^{— / —} мышей ( n = 9) собрано 16– 28 недель после начала лечения 4NQO. ч. Репрезентативные изображения окрашивания H&E и X-gal (синий цвет) опухолей плоскоклеточного желудка. Окрашивание X-gal используется для визуализации экспрессии Krt76.Пунктирными линиями обозначена плоская область живота. Масштабные линейки: 100 мкм

Для изучения значимости подавления Krt76, которое происходит в человеческих OSCC ¹⁰, мы отслеживали изменения в экспрессии Krt76 с помощью мечения LacZ у мышей Krt76 ^+/-, обработанных 4NQO. Подавление Krt76 впервые наблюдалось в гиперпластическом оральном эпителии (Fig. 5d; 13 из 15 мышей), что согласуется с находками у пациентов-людей ¹⁰. 10 из 13 дисплазий и 4 из 4 инвазивных ПКР имели очаговую или полную потерю Krt76 (рис.5г, стрелка). Тем не менее, даже когда опухоли развивались у одной и той же мыши, некоторые поражения теряли экспрессию Krt76, тогда как другие сохраняли ее (Fig. 5d, I и II). Это было подтверждено иммуноокрашиванием на Krt76; как и ожидалось (Fig. 1, Supplementary Fig. 3d), Krt76, когда присутствует, коэкспрессируется с маркерами дифференцировки, такими как Loricrin (Fig. 5e).

Затем мы сравнили частоту возникновения опухолей полости рта у мышей Krt76 ^{+ / +}, Krt76 ^+/- и Krt76 ^{— / —} (рис.5е). Не было значительных различий между мышами Krt76 ^{+ / +} и Krt76 ^+/-; однако мыши Krt76 ^{— / —} разработали OSCC раньше. У мышей Krt76 ^{— / —} среднее начало повреждений было через 12 недель после лечения ( n = 16), по сравнению с 17 неделями у контрольных мышей ( n = 14 Krt76 ^{+ / +} и n. = 27 Krt76 ^+/-, p <0,0001). Более того, у мышей Krt76 ^{— / —} заболеваемость составила 100% к 14 неделям (рис.5f, n = 16). Многие из опухолей имели области, которые были LacZ-отрицательными, что указывало на подавление Krt76 или потерю Krt76-экспрессирующих клеток (фиг. 5d).

Ни у одной из контрольных мышей Krt76 ^{+ / +} или Krt76 ^+/- не развились опухоли желудка к 28 неделям после начала лечения 4NQO (рис. 5g). Однако у мышей Krt76 ^{— / —} к 16-й неделе начали развиваться опухоли плоского желудка, а к 28-й неделе у 89% мышей была опухоль желудка (фиг. 5g). В железистом желудке опухолей и дисплазий не наблюдалось независимо от генотипа (рис.5ч). Как показано на фиг. 5h (стрелка), в опухолях желудка наблюдалось значительное подавление экспрессии Krt76.

Мы пришли к выводу, что абляция Krt76 ускоряет индуцированное 4NQO прогрессирование опухоли в тканях, где экспрессируется Krt76, а именно в полости рта и плоском желудке.

Целостность эпителия языка и желудка

Ранее сообщалось, что эпидермис Krt76 ^{— / —} демонстрирует сниженную экспрессию белков плотного соединения, клаудинов, и увеличение количества надбазальных слоев ^12,13 (дополнительный рис.3е). Напротив, не было снижения экспрессии Claudin1, Claudin3 или Claudin7 в Krt76 ^{— / —} эпителии языка или желудка (Supplementary Fig. 3f). Не было различий в общей толщине эпителия языка и желудка между контрольными мышами и мышами Krt76 ^{— / —}, а также в супрабазальных (лорикрин, филаггрин или инволукрин-положительный) слоях (дополнительный рис. 3d, e), хотя по Q -ПЦР снижение инволукрина наблюдалось в желудке Krt76 ^{— / —} (дополнительный рис.3е).

Целостность эпителия ротового эпителия мышей Krt76 ^{— / —} оценивали с помощью анализа проникновения красителя толуидиновый синий ²⁴ целиком и не было обнаружено дефектов (дополнительный рис. 3b). Кроме того, после введения FITC-декстрана через желудочный зонд не было различий в концентрации FITC-декстрана в сыворотке крови между контрольными мышами и мышами Krt76 ^{— / —} (дополнительный рис. 3c). Ранее сообщалось, что задержка образования эпидермального барьера ¹² была подтверждена (дополнительный рис.3а).

Чтобы проверить, увеличилось ли проникновение комменсальных микроорганизмов, которые могут привести к активации иммунных клеток, мы измерили бактериальную нагрузку эпителия языка и желудка с помощью окрашивания по Граму и выполнили полную флуоресцентную гибридизацию in situ (FISH) с универсальный бактериальный зонд (BacUni) ²⁵. Проникновение бактерий в основном ограничивалось ороговевшими слоями нитевидных сосочков языка как у мышей Krt76 ^{— / —}, так и у контрольных мышей, что демонстрирует отсутствие значительной разницы в бактериальной нагрузке или проникновении (дополнительный рис.3г-ч).

Мы пришли к выводу, что потеря Krt76 не нарушила целостность и барьерные свойства эпителия языка и желудка и что повышенная частота опухолей у мышей Krt76 ^{— / —} не связана с дефектным формированием эпителиального барьера.

Местный и системный воспалительный ответ на канцероген

Поскольку у мышей Krt76 ^{— / —} проявляется местное и системное воспаление, мы исследовали, усугублялось ли это лечение 4NQO. Через 2 недели лечения 4NQO собирали язык и плоскоклеточный желудок, чтобы оценить, изменились ли уровни воспалительных цитокинов.Уровни цитокинов увеличивались при обработке 4NQO как контрольных мышей Krt76 ^+/-, так и мышей Krt76 ^{— / —} по сравнению с необработанными мышами (фиг. 6a по сравнению с фиг. 3c). Однако уровни сыворотки крови IFNγ, IL-4, IL-6, IL-10 и TNFα были значительно выше у обработанных 4NQO Krt76 ^{— / —}, чем у контрольных мышей (фиг. 6a).

Рис. 6

Инфильтрация популяций иммунных клеток в строму опухоли. a Уровни цитокинов в сыворотке крови контрольных мышей и мышей Krt76 ^{— / —} после 2 недель лечения 4NQO, оцененные с помощью анализа CBA (среднее значение ± s.e.m., непарный t -тест, 4 мыши на каждый генотип, измерено в двух экземплярах, эксперимент повторен дважды). b Репрезентативные изображения иммуноокрашивания CD45 и кератина 14 в поражениях языка, обработанных 4NQO. Стрелка и стрелка указывают на локальные скопления клеток CD45 ⁺. c Количественная оценка инфильтрирующих лейкоцитов CD45 ⁺ на обработанном 4NQO языке ( n = 3–8 мышей / генотип,> 4 микроскопических изображения на область, средние значения ± s.e.m., непарный t -тест). d Репрезентативное изображение экспрессии CD45 и кератина 14 в опухоли желудка. e Репрезентативные изображения Tregs Foxp3 ⁺ на нормальном языке, обработанном 4NQO (т.е. до развития гиперплазии), и дисплазиях у контрольных мышей и мышей Krt76 ^{— / —}. f , g Репрезентативные изображения иммуноокрашивания Foxp3 ⁺ Treg в обработанном 4NQO нормальном желудке ( f ) и опухолях ( g ). e — g Пунктирные линии обозначают эпителиально-стромальную границу; стрелки обозначают FoxP3 ⁺ ячеек. ч Количественная оценка инфильтрации Foxp3 ⁺ Treg в обработанном 4NQO языке и плоскоклеточном желудке ( n = 3–8 мышей на состояние и на генотип,> 4 микроскопических изображения на область, средние значения ± средн., Непарные t — контрольная работа). i Резюме проточного цитометрического анализа% CD45 ⁺, CD4 ⁺ или эффекторных Т-клеток (CD4 ⁺ CD44 ⁺ CD62L ^{низкий)} клеток в общем количестве живых клеток и Foxp3 ⁺ Tregs в общее количество CD4 ⁺ CD25 ⁺ Т-клеток в эпителии языка и желудка после обработки 4NQO контрольных мышей и мышей Krt76 ^{— / —} ( n = 4 мыши / генотип, средние значения ± s.э.м., непарный т -тест). j Количественная ОТ-ПЦР мРНК IL-18 и IL-33 на обработанном 4NQO языке и сквамозном желудке, нормализованная по глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназе ( n = 4 мыши / генотип, среднее ± среднее значение биологических и технических троек) ; непарный т -тест). * p ≤ 0,05, ** p ≤ 0,01, *** p ≤ 0,001; **** п ≤ 0,0001; нс не имеет значения. Масштабные линейки: 100 мкм

В языке до обработки 4NQO было значительно больше стромальных клеток CD45 ⁺ у Krt76 ^{— / —} по сравнению с контрольными мышами (рис.3f, g) после 2 недель лечения и при гиперплазии, вызванной 4NQO (рис. 6b, c). В желудке Krt76 ^{— / —} количество локальных клеток CD45 ⁺ увеличивалось в строме, прилегающей к опухолям, индуцированным 4NQO (рис. 6d).

Иммунофлуоресцентное маркирование Foxp3 выявило увеличение Treg как на языке, так и на плоском желудке мышей Krt76 ^{— / —} по сравнению с контрольными мышами, будь то нормальная ткань или ткань, несущая опухоль (Fig. 6e-h). Количество Treg увеличивалось при гиперплазиях и дисплазиях языка Krt76 ^{— / —} по сравнению с контролем, а также наблюдалось заметное накопление Treg в строме опухоли (рис.6д, ж, наконечники стрелок, з). Более того, поражения языка и желудка Krt76 ^{— / —} показали сопутствующее снижение эффекторных Т-клеток (рис. 6i). Общее количество клеток CD4 ⁺ увеличивалось в желудке, но не на языке (рис. 6i). В соответствии с находками на мышах, наблюдалось увеличение количества стромальных FoxP3 ⁺ клеток, лежащих в основе Krt76-отрицательных ^— областей человеческого OSCC (фиг. 7a), даже когда маркер дифференцировки Involucrin все еще экспрессировался (фиг. 7b).

Фиг.7

Экспрессия Krt76 и инфильтрация Foxp3 ⁺ Treg в OSCC человека. a Репрезентативные изображения окрашивания H&E и иммуноокрашивания для Tregs Krt76 и Foxp3 ⁺ в человеческих OSCC. b Репрезентативные изображения иммуноокрашивания Krt76, кератина 14 (Krt14) и инволюкрина (IVL) с ядерным контрастным окрашиванием DAPI в OSCC человека. Шкала: 100 мкм

Два цитокина, которые контролируют Treg, — это IL-18, который регулирует функцию Treg ^26,27, и IL-33, который конститутивно экспрессируется в клетках барьерного эпителия ^28,29 и способствует накоплению Treg и поддержание воспаленных тканей ³⁰.В соответствии с накоплением Treg уровни IL-18 были значительно увеличены у обработанных 4NQO (2 недели) Krt76 ^{— / —} по сравнению с языком Krt76 ^+/- (рис. 6j). Кроме того, IL-33 был увеличен в языке Krt76 ^{— / —} и плоском желудке после лечения 4NQO (рис. 6j).

Мы пришли к выводу, что повышенная предрасположенность мышей Krt76 ^{— / —} к раку коррелирует с усилением системной и воспалительной реакции на канцероген, включая накопление Treg на языке и плоскоклеточном желудке.

Повышенные Tregs коррелируют с ускоренным образованием опухоли

Чтобы проверить, влияет ли нацеливание на Tregs на начало опухоли у мышей Krt76 ^{— / —}, мы разработали смешанные химеры костного мозга (BM) путем сублетального облучения контрольных и Krt76 ^{— / —} мышей и восстановление их с помощью BM из трансгенных мышей с истощением регуляторных Т-клеток (DEREG) ³¹ (фиг. 8a, b). Мыши DEREG экспрессируют слитый белок зеленого флуоресцентного белка, усиленного рецептором дифтерийного токсина (DTR-eGFP), под контролем эндогенного промотора Foxp3, что делает возможным как визуализацию, так и индуцированное дифтерийным токсином удаление Foxp3 ⁺ Treg.Успешное приживление было подтверждено путем анализа процентного содержания Treg Foxp3GFP ⁺ в химерах через 6 недель после восстановления (фиг. 8c). Как и ожидалось, в Krt76 ^{— / —} было больше Tregs Foxp3GFP ⁺, чем у контрольных мышей (рис. 8c).

Рис. 8

4NQO-индуцированный канцерогенез у химерных мышей DEREG. а Экспериментальная схема. Мышей-реципиентов дважды облучали 5,5 Гр и получали 2 × 10 ⁶ клеток из BM мыши DEREG путем инъекции в хвостовую вену.Мышам давали возможность восстановиться в течение 6 недель перед инъекцией DT для удаления Treg. Контрольным мышам вводили PBS. b Схема переноса BM и абляции Treg путем инъекции PBS-контроля или DT в течение 5 недель с последующим протоколом туморогенеза 4NQO. c Эффективность приживления с помощью Foxp3GFP ⁺ донорских Treg и процент истощения донорских Treg после обработки DT подтверждены проточным цитометрическим анализом клеток крови. d, e Сводка проточного цитометрического анализа% общих Treg (CD4 ⁺ CD25 ⁺ Foxp3 ⁺) в общем количестве CD4 ⁺ клеток в лимфатических узлах ( d ) и селезенке ( e ) контрольных химерных мышей DEREG / Krt76 ^+/- ( d, e ) и DEREG / Krt76 ^{— / —} ( d ), получавших DT или PBS.( n = 4–6 животных на группу, среднее ± стандартное отклонение, критерий Манна – Уитни). f Резюме анализа проточной цитометрии% донора (CD4 ⁺ CD25 ⁺ Foxp3 ⁺ GFP ⁺) и реципиента (CD4 ⁺ CD25 ⁺ Foxp3 ⁺ GFP ^—) Foxp3 ⁺ Tregs в общем CD4 ⁺ клеток лимфатических узлов от мышей-химер DEREG / Krt76 ^{— / —}, получавших DT или PBS ( n = 4–6 животных / группу, среднее ± s.э.м., непарный т -тест). г Заболеваемость опухолями у химерных мышей DEREG / Krt76 ^{+ / +} и DEREG / Krt76 ^{— / —}, получавших DT или PBS ( n = 5–6 животных / группу, однофакторный дисперсионный анализ ANOVA, Mantel-Cox тест, p = 0,013 для DEREG / Krt76 ^{— / —} и p = 0,016 DEREG / Krt76 ^+/-). * p ≤ 0,05, ** p ≤ 0,01, *** p ≤ 0,001; ns несущественно

Мы удалили донорские Treg путем инъекции дифтерийного токсина (DT или PBS в качестве контроля) в течение первых 5 недель протокола канцерогенеза 4NQO (рис.8б). Этот момент времени был выбран так, чтобы он совпадал с развитием гиперплазии (рис. 6h). После инъекции DT в течение 5 недель Treg-клетки донора Foxp3GFP ⁺ были значительно снижены у химерных мышей DEREG / Krt76 ^{— / —} и контрольных DEREG / Krt76 ^{+ / +} (фиг. 8c). Однако, когда у всех мышей в каждой когорте развились опухоли и были подвергнуты анализу конечных точек, общее количество Treg значительно увеличилось у мышей, получавших DT, по сравнению с мышами DEREG / Krt76 ^{— / —}, получавших PBS (рис.8г). У контрольных мышей DEREG / Krt76 ^{+ / +} увеличение Treg в лимфатических узлах после лечения DT не было статистически значимым (фиг. 8d). Однако в селезенке мышей DEREG / Krt76 ^{+ / +}, обработанных DT, наблюдалось значительное увеличение Treg (фиг. 8e). Дальнейший анализ химер Krt76 ^{— / —} (рис. 8f) показал, что, хотя, как и ожидалось, Tregs донора GFP ⁺ были уменьшены, наблюдалось значительное увеличение Treg получателя GFP ^—, что объясняет увеличение общего количества Treg. .

Количественное определение канцерогенеза, индуцированного 4NQO, показало, что лечение DT ускоряет образование опухолей как у контрольных мышей, так и у мышей Krt76 ^{— / —} (фиг. 8g). Таким образом, более высокие уровни Foxp3 ⁺ Tregs коррелируют с более быстрым развитием опухоли как у контрольных мышей, так и у мышей Krt76 ^{— / —}. Следовательно, основной эффект делеции Krt76 на восприимчивость к опухоли может быть связан с повышенным накоплением Treg.

OGX Anti-Breakage Keratin Oil Shampoo 13 унций — Pharmapacks

Наслаждайтесь богатыми, укрепляющими протеинами кератина, которые укрепляют каждую прядь, повышая эластичность, предотвращая поломку, вызванную расчесыванием и укладкой, а масло арганы смягчает и смягчает, создавая люминесцентный блеск.Пряди укрепляются изнутри и питаются по всей длине, делая волосы более длинными и сильными. Уникальная смесь поверхностно-активных веществ, не содержащих сульфатов, предотвращает ломкость. Зачем вам это … Сила прекрасна! Особенно прочные, сексуальные пряди! Защищайтесь от секущихся кончиков и летящих с дороги. Избавься от всех этих надоедливых сломанных прядей волос! Более сильные волосы могут стать длиннее и красивее. Шампунь с кератиновым маслом OGX:

Содержит богатые, укрепляющие протеины кератина, которые укрепляют каждую прядь, повышая эластичность, чтобы противостоять ломкости, вызванной расчесыванием и укладкой
Помогает справиться с вьющимися волосами
Предназначен для предотвращения секущихся кончиков и вылетания
Аргана масло кондиционирует и разглаживает, чтобы придать красивый блеск
Формула шампуня против ломкости, разработанная для питания волос изнутри
Помогает укрепить волосы, чтобы они стали длиннее
Содержит 13 жидких унций шампуня с кератином OGX

Ингредиенты: вода (вода), олефинсульфонат натрия C14-16, кокоилизетионат натрия, гидроксиэтилкоко / изостеарамид PPG-2, кокамидопропилгидроксисультаин, гидролизованный кератин, спиноза спиноза (арганиметикон), масло гликозилированного аргании -120 Метилглюкоза диолеат, кокамидопропилбетаин, хлорид цетримония, глицерин, гуаровая гидроксипропилтримония хлорид, поликватерниум-6, поликватерниум-10, лаурет-23, тридецет-12, пропиленгликольдиметилметакрилат натрия, диметилметакрилат натрия хлорид, диметилметакрилат натрия хлорид Мочевина, йодопропинилбутилкарбамат, ароматизатор (Parfum), желтый 5 (CI 19140), желтый 6 (CI 15985), синий 1 (CI 42090).

Используйте стрелки влево / вправо для навигации по слайд-шоу или проведите пальцем влево / вправо при использовании мобильного устройства

Преимущества, побочные эффекты, дозировка и взаимодействие

Масло арганы — это натуральное масло, получаемое из ядер арганового дерева ( Argania spinosa ), произрастающего в Марокко. Масло арганы, богатое жирными кислотами и антиоксидантами, часто используется в уходе за кожей как средство против старения. Масло арганы также используется в кулинарии, потребление которого, как считается, имеет медицинские преимущества, включая лечение высокого кровяного давления и диабета.

Польза для здоровья

Масло арганы продается для нескольких различных целей, в первую очередь для ухода за волосами и ухода за кожей. В последние годы аргановое масло стало настолько популярным в косметике, что правительство Марокко активизировало усилия по увеличению выращивания аргановых рощ. Иногда его даже называют «жидким золотом».

Не менее популярно использование арганового масла в кулинарии. Потребителей привлекает не только его мягкий пряный вкус (напоминающий масло семян тыквы), но и его предполагаемая польза для здоровья.Как полиненасыщенное масло, оно считается полезным для сердца и обладает такими же полезными свойствами, что и оливковое масло.

Уход за кожей

Сторонники утверждают, что аргановое масло может лечить широкий спектр кожных заболеваний, включая прыщи, экзему, псориаз, ожоги и кожные инфекции. Высокая концентрация антиоксидантов в аргановом масле, включая олеиновую кислоту и линолевую кислоту, побудила некоторых заявить, что оно может бороться со старением, нейтрализуя свободные радикалы, повреждающие клетки.

Дерматологи также говорят, что жирные кислоты омега-3, содержащиеся в аргановом масле, могут увеличить выработку коллагена и сделать кожу гладкой, уменьшая тонкие линии и морщины.

Помимо использования в кремах для кожи, лосьонах, сыворотках, масках для лица и мазях, аргановое масло часто добавляют в шампуни и кондиционеры или используют в качестве массажного масла.

Согласно исследованию, проведенному в 2015 году в Clinical Interventions in Aging , местное использование арганового масла у женщин в постменопаузе привело к значительному увеличению эластичности кожи через 60 дней. Этот эффект был дополнительно усилен пероральным употреблением арганового масла у половины участвовавших женщин.Обнадеживая, но обратите внимание, что выводы были ограничены отсутствием контрольной группы плацебо.

Польза арганового масла при лечении ожогов и кожных инфекций гораздо менее очевидна. Хотя известно, что аргановое масло обладает антибактериальными свойствами, неизвестно, достаточно ли его эффект, чтобы предотвратить инфекцию или помочь в заживлении.

Исследование, проведенное в 2016 году в Ostomy Wound Healing , намекало на преимущество, при котором крысы, леченные от ожогов второй степени аргановым маслом, заживали быстрее, чем те, которые получали 1% сульфадиазин серебра (стандартный крем от ожогов) или плацебо.(Результаты любых исследований на животных должны быть воспроизведены на людях, чтобы их можно было считать применимыми.)

Уход за волосами

Считается, что масло арганы улучшает качество волос, предотвращая повреждение внешней кутикулы стержня волоса, сохраняя при этом естественные пигменты (меланин), которые придают волосам их цвет.

Согласно исследованию, проведенному в Бразилии в 2013 году, аргановое масло способно улучшить качество волос и удерживать краску после нескольких процедур окрашивания волос.Окрашивание волос — одна из самых суровых процедур, которым могут подвергнуться волосы, и аргановое масло, по-видимому, обладает защитным эффектом по сравнению с коммерческими кондиционерами для волос.

Оральное терапевтическое применение

Некоторые сторонники считают, что потребление арганового масла может помочь в лечении или профилактике определенных заболеваний, включая остеоартрит, высокое кровяное давление, диабет, эпилепсию и атеросклероз. На сегодняшний день существует несколько научных исследований, подтверждающих эти утверждения.

Исследование 2013 года, опубликованное в журнале Journal of Complementary and Integrative Medicine , пришло к выводу, что у мышей с диабетом, получавших аргановое масло, наблюдалось гораздо большее снижение уровня сахара в крови, чем у нелеченных мышей с этим заболеванием.Более того, масло, по-видимому, стабилизировало кровяное давление, чего не наблюдалось у мышей, не получавших лечения.

В аналогичном исследовании Nutrition, Metabolism and Cardiovascular Diseases сообщается, что аргановое масло ослабляет эффекты ожирения у мышей, получавших диету с высоким содержанием жиров. По сравнению с необработанными мышами, мыши, получавшие аргановое масло, имели более низкие уровни общего холестерина, триглицеридов, глюкозы, инсулина и «плохого» холестерина ЛПНП. При этом аргановое масло не повышает уровень «хорошего» холестерина ЛПВП, жизненно важного для здоровья сердца.

Пока неясно, можно ли воспроизвести эти же преимущества у людей. К сожалению, аргановое масло остается малоизученным по сравнению с другими полезными для сердца полиненасыщенными маслами.

Возможные побочные эффекты

Масло арганы обычно считается безопасным для употребления и местного применения. Однако у некоторых людей аргановое масло может вызывать форму аллергии, известную как контактный дерматит, которая характеризуется появлением сыпи, покраснения и зуда в месте нанесения.

Масло арганы также содержит токоферолы, форму витамина Е, которые могут замедлять свертывание крови и взаимодействовать с антикоагулянтами, такими как кумадин (варфарин).Неизвестно, достаточно ли концентрации токоферолов в аргановом масле, чтобы вызвать взаимодействие.

Дозировка и подготовка

Масло арганы продается как кулинарный ингредиент и как общеукрепляющее средство. Часто между двумя вариантами не будет заметной разницы, кроме цены. Кулинарное масло арганы обычно дешевле, хотя высококачественные масла холодного отжима иногда могут быть такими же дорогими, как лечебные масла.

Нет никаких рекомендаций по правильному использованию арганового масла.При местном применении большинство производителей рекомендуют нанести несколько капель масла на кожу или массировать кожу головы перед тем, как расчесать волосы.

Что искать

Масло арганы и продукты, содержащие его, можно найти в Интернете, а также во многих магазинах натуральных продуктов, аптеках и специализированных салонах красоты. Бутылки должны быть стеклянными и иметь темный оттенок (например, янтарный), что помогает предотвратить ухудшение качества масла, которое может произойти при воздействии света.

При использовании в терапевтических целях по возможности выбирайте органическое масло холодного отжима.Холодное прессование снижает окисление, которое может повысить кислотность масел, полученных термическим прессованием. Затем масло можно очистить до получения прозрачной консистенции и характерного желтовато-золотистого оттенка. Некоторые аргановые масла дезодорируются, что не влияет на качество.

Органические масла должны иметь органическую сертификацию Министерства сельского хозяйства США (USDA).

Другие вопросы

Срок годности арганового масла истекает?
Масло арганы имеет относительно длительный срок хранения (до двух лет), хотя на его качество может влиять высокая температура и ультрафиолетовое (УФ) излучение солнца.

Чтобы избежать этого, храните аргановое масло в оригинальной стеклянной посуде в прохладном помещении вдали от прямых солнечных лучей. Хранение в холодильнике поможет сохранить масло. Хотя он застынет, он вернется в нормальное состояние, как только дадут ему нагреться до комнатной температуры.

Утилизируйте любое масло, срок годности которого истек, имеет прогорклый запах или внезапно становится мутным или обесцвеченным.

Как можно использовать аргановое масло в кулинарии?
Масло арганы можно использовать как оливковое масло или любое другое масло для жарки.Однако из-за его цены — примерно 30 долларов за бутылку на 8 унций (250 миллилитров) — большинство людей предпочитают поливать ею макароны, кус-кус, тушеные блюда, салаты и другие готовые блюда. Некоторые аргановые масла получают из слегка поджаренных ядер, которые придают маслу приятный ореховый вкус. Поджаривание действительно снижает часть питательной ценности, но недостаточно, чтобы подорвать его диетические преимущества.

Лечение выпадения волос: сандаловое дерево стимулирует фолликулы для увеличения роста волос.

Когда дело доходит до борьбы с ужасным состоянием выпадения волос, сандаловое дерево может быть одним из самых недорогих и естественных способов стимулировать рост волос.По сравнению с покупными продуктами для волос, которые могут содержать химические вещества, которые могут быть вредными для волос в долгосрочной перспективе, использование сандалового дерева является полностью естественным средством, которое работает для большинства людей.

В традиционной медицине сандаловое масло используется в качестве антисептика и вяжущего средства, а также для лечения головных болей, болей в животе, расстройств мочеиспускания и половых органов.

В Индии эфирное масло сандалового дерева используется для лечения воспалительных и высыпаний на коже.

Доктор Джош Экс сказал: «Масло сандалового дерева содержит два основных активных компонента, альфа и бета санталол.

«Эти молекулы производят сильный аромат сандалового дерева.

ПРОЧИТАЙТЕ БОЛЬШЕ: Диабет 2 типа: масло для жарки снижает уровень сахара в крови и снижает риск сердечных заболеваний.

«Альфа-санталол специально оценивался на предмет множества преимуществ для здоровья.

«Некоторые из этих преимуществ включают улучшение контроля уровня глюкозы в крови у животных, уменьшение воспаления и помощь в уменьшении распространения рака кожи».

Сандаловое масло с приятным запахом используется в качестве ингредиента во многих парфюмерии, косметике и мыле.

К свойствам сандалового масла относятся санталол и сандалор — органические соединения.

НЕ ПРОПУСТИТЕ

Санталол отвечает за его аромат и успокаивающее действие.

Санталол, сандолор и сандал — эфирные масла, которые могут способствовать росту волос.

Исследования показали, что воздействие на клетки кожи человека искусственного запаха сандалового дерева, напоминающего запах сандалора, может помочь уменьшить выпадение волос.

Сандалор часто добавляют в отдушки и увлажняющие средства, чтобы придать сандаловому дереву его аромат.

Он также использовался в предыдущих экспериментах по изучению его воздействия на кератин.

Заинтригованные возможным влиянием сандалора на рост волос, исследователи из лаборатории монастыря в Мюнстере подвергли ткани черепа человека воздействию сандалора с впечатляющими результатами.

Исследователи из Манчестерского университета обнаружили, что нанесение сандалового дерева на кожу головы помогает продлить рост человеческих волос.

Результаты исследования были опубликованы в журнале Nature Communications, в которых объясняется, как эксперимент, проведенный с синтетическим материалом и образцами кожи человека, дал поразительные результаты.

Хотя редко, у некоторых людей может быть аллергическая реакция, поэтому лучше сначала проверить небольшой участок кожи, смешанный с увлажняющим кремом.

Подождите, чтобы увидеть, отреагирует ли ваша кожа, прежде чем использовать большее количество масла.

Патч-тест обычно занимает два дня, поэтому убедитесь, что у вас есть время, чтобы увидеть, развивается ли реакция.

После того, как двухдневная отметка пройдена без проблем, используйте масло сандалового дерева.

Каковы побочные эффекты шампуня с кератином?

Многие женщины и даже некоторые мужчины хотят иметь роскошные, гладкие и блестящие волосы, и многие из них обращаются к кератиновым препаратам, чтобы получить их, даже несмотря на то, что есть потенциально разрушительные и опасные побочные эффекты кератинового шампуня и другие продукты.

Одним из ключевых ингредиентов большинства шампуня и сывороток с кератином является соединение, которое обычно вызывает боль в горле, кровотечение из носа и раздражение глаз.

Что такое кератиновый шампунь?

Начнем с того, что кератин — это белок, встречающийся в природе в волосах, а также в коже и ногтях человека. Он также является основным белком в копытах и рогах животных, шерсти и перьях. Прочность волокон делает его структурным и защитным компонентом.

Промышленность по уходу за волосами начала использовать кератин как естественное средство повышения прочности и сглаживания текстуры человеческих волос несколько десятилетий назад.Миллионы людей тратят миллиарды долларов, пытаясь заставить свои волосы подчиниться последней тенденции в том, что считается красивым. В последние несколько десятилетий американские женщины считают, что блестящие гладкие пряди предпочтительнее вьющихся прядей.

В результате появился салонный кератиновый уход, который также называют «бразильским выбросом».

Салонный уход включает нанесение раствора, содержащего кератин и производное формальдегида, на волосы и нанесение его на пряди, чтобы разорвать связи волос, а затем «запечатать их в более прямом положении», говорится в статье Harper’s Bazaar.«Затем раствор сушат феном и герметизируют утюгом, и результат может сохраняться от трех до шести месяцев».

Когда дело доходит до лечения кератином, «кератин — не лучшая звезда», — говорится в статье в Marie Claire . «Остальные ингредиенты есть».

Формальдегид создает «расслабляющий» эффект процедуры, расслабляя стержни волос и создавая ровный вид. Кератиновый компонент обволакивает каждый волос как защитный восковой слой.

Кератиновые процедуры были одними из самых популярных и востребованных салонных процедур на протяжении почти 20 лет. Шампуни с кератином были созданы в ответ на этот коммерческий успех.

Шампуни с кератином содержат те же ингредиенты, что и салонные процедуры, но в меньших концентрациях. Поскольку они разбавлены, они предназначены для регулярного использования и со временем могут уменьшить вьющиеся волосы и сделать их гладкими.

Есть ли побочные эффекты от шампуня с кератином?

Как и салонные кератиновые процедуры, кератиновые шампуни обычно содержат производные формальдегида, что может вызывать беспокойство, поскольку формальдегид является канцерогеном.

«Есть вероятность, что это химическое вещество все еще может присутствовать в средствах для выпрямления без формальдегида», — процитировала Мари Клер слова специалиста по цвету волос Бренды Камт. «Формальдегид на самом деле не является отдельным ингредиентом — это газ, выделяемый другими химическими веществами, подвергающимися воздействию тепла. Так что технически продукт может сказать, что он не содержит формальдегида, но при этом содержит ингредиенты, создающие газ ».

Поскольку они содержат ингредиенты, которые могут приводить к появлению формальдегида, есть некоторые возможные побочные эффекты кератиновых шампуней и средств лечения, включая боль в горле, кровотечение из носа и раздражение глаз, согласно статье Harper’s Bazaar.Кашель и респираторные проблемы также входят в число возможных побочных эффектов кератиновых продуктов, содержащих формальдегид, а также раздражение кожи головы и возможное выпадение волос .

Насколько серьезными могут быть побочные эффекты шампуня с кератином?

Центры США по контролю и профилактике заболеваний считают формальдегид канцерогеном , что означает, что он может вызывать рак , в частности рак желудка, кожи, носа и глотки, а также лейкоз. Как правило, риск является значительным только при длительном воздействии высоких уровней формальдегида.

Подал ли кто-нибудь иск о кератине?

У некоторых потребителей был очень плохой опыт лечения кератином и шампунями с кератином — настолько, что они подали коллективных исков против некоторых производителей. В 2012 году в федеральный суд штата Иллинойс был подан коллективный иск против компании Unilever United States Inc. в связи с ее 30-дневным сглаживающим набором Suave Professionals Keratin Infusion.

Комплект был отозван в 2012 году после жалоб, что он принес больше вреда, чем пользы.Истцы по делу заявили, что побочный эффект кератина на самом деле вызвал значительную потерю волос.

Согласно коллективному иску, 30-дневный разглаживающий набор Suave Professionals Keratin Infusion содержал опасные ингредиенты, в том числе DMDM Hydantoin, производное формальдегида, которые вызывали травмы, и Unilever не предупредила потребителей о рисках.

Кому противопоказано употреблять масло на голодный желудок

Кунжутное масло при гастрите и панкреатите: как принимать

Химический состав кунжутного масла

Кунжутное масло для желудка: 3 ценных свойства, которыми объясняется польза при гастрите

Кунжутное масло при панкреатите

Способ применения кунжутного масла

ЛЕЧЕНИЕ РАССТРОЙСТВА ЖЕЛУДКА ПОСЛЕ ГЛАЗУРИ СО СЛИВОЧНЫМ КРЕМОМ — ХОРОШЕЕ ЗДОРОВЬЕ

Содержание:

Пищевое отравление

Непереносимость лактозы

Аллергия на молоко

Связанные статьи LeafTv

Как взбить сливочное масло в блендере

Как определить прогорклое масло

Как хранить и замораживать карамель

Как хранить глазурь для сливочного сыра

Что я могу добавить в сливки из пшеницы?

Предупреждение об аллергии на молоко

Looduse Abi — 🌿Льняное масло — один из самых…

Изготовление язвенно-адгезивного кератинового гидрогеля для полости рта для заживления язвы желудка у крысы | Регенеративные биоматериалы

Аннотация

Введение

Материалы и методы

Материалы

Экстракция кератина человеческого волоса

Приготовление кератиновых гидрогелей

Морфологическое наблюдение

Исследования водопоглощения

Реологические свойства

Создание животноводческих моделей язвы желудка

Оценка адгезионных свойств язвы

Макроскопическое наблюдение

Гамма-сцинтиграфия

Лечение язв, вызванных этанолом

Определение язвенного индекса и процента торможения

Гистопатологическая оценка

Биохимический анализ

Статистический анализ

Результаты

Подготовка КХГ

Характеристика KHG

Оценка адгезионных свойств язвы

Лечение язв, вызванных этанолом

Гистопатология ткани

Биохимические факторы ткани

Обсуждение

Заключение

Финансирование

Список литературы

Работают ли кератиновые добавки для волос?

Для чего используются кератиновые добавки?

Работают ли кератиновые добавки?

Побочные эффекты кератиновых добавок

Предупреждение

Иммуномодулирующая роль кератина 76 при раке полости рта и желудка

Кератин 76 экспрессируется в эпителии полости рта и желудка

Потеря Krt76 приводит к увеличению лимфатических узлов и селезенки

Увеличение эффекторных и регуляторных Т-клеток

Характеристика Treg и эффекторных T-клеток

Повышенная заболеваемость опухолями у мышей Krt76

Целостность эпителия языка и желудка

Местный и системный воспалительный ответ на канцероген

Повышенные Tregs коррелируют с ускоренным образованием опухоли

OGX Anti-Breakage Keratin Oil Shampoo 13 унций — Pharmapacks

Преимущества, побочные эффекты, дозировка и взаимодействие

Польза для здоровья

Уход за кожей

Уход за волосами

Оральное терапевтическое применение

Возможные побочные эффекты

Дозировка и подготовка

Что искать

Другие вопросы

Лечение выпадения волос: сандаловое дерево стимулирует фолликулы для увеличения роста волос.

Каковы побочные эффекты шампуня с кератином?

Что такое кератиновый шампунь?

Есть ли побочные эффекты от шампуня с кератином?

Насколько серьезными могут быть побочные эффекты шампуня с кератином?

Подал ли кто-нибудь иск о кератине?

Добавить комментарий Отменить ответ